基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取       
摘要:
目的:建立受强力霉素调控高表达外源基因的真核表达体系-永生化骨骺干细胞株,为调控甲状旁腺相关肽的不同片断在骨骺干细胞中的表达打下基础.方法:实验于2006-09/2007-03在同济医学院矫形外科实验室完成.①实验材料:SD大鼠的乳鼠由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供,雄鼠4只,雌鼠6只.②实验方法:取SD大鼠的乳鼠10只,显微镜下选取La Croix环处的软骨及软骨前体细胞(骨骺干细胞),采用磁性细胞分选的方法,分离出原代骨骺干细胞,并用PCMVSV40质粒将其永生化.用脂质体介导法将pTet-on质粒转染已永生化的骨骺干细胞,通过G418筛选并经有限稀释法进行单克隆化,得到稳定转染的抗性克隆并将其分别扩增培养.将pTRE2hyg-IUC质粒瞬时转染扩增后的单克隆细胞,加入终浓度为1 mg/L的强力霉素诱导剂培养,48 h后逐一检测每个细胞株的荧光素酶表达活性,逐一筛选强力霉素调控高表达外源基因的永生化骨骺干细胞株.③实验评估:将挑选出的第23号克隆扩增培养,加入0.01,0.1,0.5,1,5mg/L强力霉素进行诱导培养,并设置3组对照,一组为空白对照(蒸馏水),一组为未转染Tet-on系统的骨骺干细胞(均加入1 mg/L 0.1 mg/强力霉素诱导),另一组为转染后的骨骺干细胞不加入强力霉素诱导.观察强力霉素对骨骺干细胞的最优诱导质量浓度. 结果:第23号克隆的细胞经诱导后荧光素酶的表达活性为85 790,而非诱导状态下该细胞株的活性为437,诱导后的活性增加196.3倍.强力霉素质量浓度梯度实验提示,强力霉素的最优诱导质量浓度是1 mg/L左右,质量浓度过高可导致细胞死亡,过低时诱导效率降低.结论:永生化骨骺干细胞株可用于真核调控高表达,为研究甲状旁腺相关肽的不同功能片断与骨骺干细胞的分化机制的关系打下了基础.
推荐文章
永生化细胞株的建立
永生化
细胞株
基因转染
永生化人前软骨干细胞株的构建
人前软骨干细胞
永生化
SV40Tag
软骨组织工程
建立永生化骨髓间充质干细胞株
骨髓间充质干细胞
端粒酶催化亚基
永生化
甲状旁腺素相关蛋白亚基因对骨骺干细胞的调控
干细胞
干细胞培养与分化
甲状旁腺相关蛋白
印第安刺猬蛋白
骨骺干细胞
增殖
分化
增殖细胞核抗原
其他基金
干细胞图片文章
内容分析
关键词云
关键词热度
相关文献总数  
(/次)
(/年)
文献信息
篇名 受强力霉素调控的永生化骨骺干细胞株的建立
来源期刊 中国组织工程研究与临床康复 学科 医学
关键词 基因表达调控 干细胞 强力霉素
年,卷(期) 2007,(33) 所属期刊栏目 技术与方法
研究方向 页码范围 6534-6537
页数 4页 分类号 R394.2
字数 6082字 语种 中文
DOI 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.33.016
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 郭风劲 华中科技大学同济医学院同济医院矫形外科 215 1233 17.0 23.0
2 王江 华中科技大学同济医学院同济医院矫形外科 25 89 5.0 8.0
3 李明辉 华中科技大学同济医学院同济医院矫形外科 8 49 3.0 7.0
4 张树威 华中科技大学同济医学院同济医院矫形外科 8 32 4.0 4.0
5 宋登新 华中科技大学同济医学院同济医院矫形外科 13 91 6.0 9.0
6 易磊 华中科技大学同济医学院同济医院矫形外科 6 18 3.0 4.0
传播情况
(/次)
(/年)
引文网络
引文网络
二级参考文献  (7)
共引文献  (16)
参考文献  (6)
节点文献
引证文献  (3)
同被引文献  (15)
二级引证文献  (7)
1988(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
1994(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
1995(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
1999(2)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(1)
2001(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
2003(2)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(1)
2004(2)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(2)
2005(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
2006(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
2007(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
2007(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(0)
2008(1)
  • 引证文献(1)
  • 二级引证文献(0)
2010(1)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(1)
2012(3)
  • 引证文献(2)
  • 二级引证文献(1)
2013(1)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(1)
2014(2)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(2)
2015(1)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(1)
2016(1)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(1)
研究主题发展历程
节点文献
基因表达调控
干细胞
强力霉素
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国组织工程研究
旬刊
2095-4344
21-1581/R
大16开
沈阳浑南新区10002信箱
8-584
1997
chi
出版文献量(篇)
55677
总下载数(次)
80
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
  • 期刊分类
  • 期刊(年)
  • 期刊(期)
  • 期刊推荐
中国组织工程研究2007年第9期 中国组织工程研究2007年第8期 中国组织工程研究2007年第7期 中国组织工程研究2007年第6期 中国组织工程研究2007年第52期 中国组织工程研究2007年第51期 中国组织工程研究2007年第50期 中国组织工程研究2007年第5期 中国组织工程研究2007年第49期 中国组织工程研究2007年第48期 中国组织工程研究2007年第47期 中国组织工程研究2007年第46期 中国组织工程研究2007年第45期 中国组织工程研究2007年第44期 中国组织工程研究2007年第43期 中国组织工程研究2007年第42期 中国组织工程研究2007年第41期 中国组织工程研究2007年第40期 中国组织工程研究2007年第4期 中国组织工程研究2007年第39期 中国组织工程研究2007年第38期 中国组织工程研究2007年第37期 中国组织工程研究2007年第36期 中国组织工程研究2007年第35期 中国组织工程研究2007年第34期 中国组织工程研究2007年第33期 中国组织工程研究2007年第32期 中国组织工程研究2007年第31期 中国组织工程研究2007年第30期 中国组织工程研究2007年第3期 中国组织工程研究2007年第29期 中国组织工程研究2007年第28期 中国组织工程研究2007年第27期 中国组织工程研究2007年第26期 中国组织工程研究2007年第25期 中国组织工程研究2007年第24期 中国组织工程研究2007年第23期 中国组织工程研究2007年第22期 中国组织工程研究2007年第21期 中国组织工程研究2007年第20期 中国组织工程研究2007年第2期 中国组织工程研究2007年第19期 中国组织工程研究2007年第18期 中国组织工程研究2007年第17期 中国组织工程研究2007年第16期 中国组织工程研究2007年第15期 中国组织工程研究2007年第14期 中国组织工程研究2007年第13期 中国组织工程研究2007年第12期 中国组织工程研究2007年第11期 中国组织工程研究2007年第10期 中国组织工程研究2007年第1期
论文1v1指导