摘要:
目的:动物实验、临床研究以及流行病学调查表明染料木黄酮可预防骨质疏松的发生,但其具体机制尚不清楚.观察染料木黄酮对成骨细胞活性的影响及其与转化生长因子β的关系.方法:实验于2001-05/2003-05在卫生学环境医学研究所生化实验室完成.①实验材料:选择出生3 d的Wistar大鼠,体质量(10±2)g.②实验方法:无菌条件下分离颅盖骨,剪碎,加入胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶,用含体积分数为0.1胎牛血清的F-12培养基重悬,调整细胞浓度后接种于25mL培养瓶中,Ⅱ代细胞用于实验.实验分为染料木黄酮组、雌激素组和对照组(吐温20),染料木黄酮组浓度分别为0.1,1,10 μmol/L,雌激素组的浓度分别为0.1,1 nmol/L.③实验评估:培养48,72 h应用四甲基偶氮唑盐测定成骨细胞增殖;培养48 h3H-胸腺嘧啶掺入实验测定DNA合成;免疫组织化学方法观察转化生长因子β的表达.结果:①染料木黄酮对成骨胞增殖的影响:与对照组相比,培养48 h后0.1,1,10 μmol/L染料木黄酮四甲基偶氮唑盐的吸光度值分别增加1.43,1.36,1.05倍;0.1,1 nmol/L雌激素组分别增加1.00倍和0.84倍;培养72 h,染料木黄酮3个浓度组分别增加1.46,1.13倍和0.93倍,雌激素组分别增加2.26倍和2.30倍;各组与对照组相比差异均有显著性(P<0.05).②3H-胸腺嘧啶掺入实验:0.1,1,10 μmol/L染料木黄酮3H-胸腺嘧啶掺入量分别比对照组增加6.45,11.29,0.47倍;0.1,1 nmol/L雌激素组增加16.5倍和15.4倍,各组与对照组相比差异均有显著性(P<0.05).③成骨细胞转化生长因子β的表达:各组成骨细胞周围均有较强的呈棕色的阳性颗粒,但染料木黄酮组与对照组相比差异无显著性(P>0.05).结论:不同浓度染料木黄酮和雌激素一样可以促进成骨细胞增殖和DNA合成,但染料木黄酮不是通过影响转化生长因子β的表达来促进成骨细胞增殖与分化,详细机制还需进一步研究.