摘要:
目的:观察钙结合蛋白D28k在小鼠肾脏发育中表达规律及定位,探讨钙结合蛋白D28k在小鼠肾脏发育中的作用.方法:实验于2006-03/09在辽宁医学院组织胚胎学实验室完成.选取25~30 g健康成年昆明小白鼠,采用检查阴道栓脱落的方法确定其受孕后,选取胚龄10,12,14,16,18 d的胎鼠和生后日龄1,3,7,14,21,40 d的仔鼠,每组取8只鼠.将各胚(日)龄小鼠剖腹取出肾脏,应用免疫荧光技术对各组小鼠肾脏钙结合蛋白D28k表达进行定性观察;应用蛋白印迹技术(Western blotting)对不同发育阶段的小鼠远端肾单位钙结合蛋白D28k的表达进行定量的测定.结果:①免疫荧光结果:钙结合蛋白D28k在胚龄10 d胎鼠肾脏未见表达,胚龄12 d在输尿管芽微量表达,胚龄14 d在输尿管芽Y型分支表达,表达量增加,胚龄16 d在输尿管芽壶腹表达强烈,且在肾单位与输尿管芽壶腹连接部有少量表达.胚龄18 d到生后7 d,钙结合蛋白D28k表达量逐渐增加,并定位于远曲小管、连接小管、皮质集合管.生后7 d到生后40 d,钙结合蛋白D28k在远曲小管、连接小管、皮质集合管表达丰富,在髓质集合管表达下降.钙结合蛋白D28k表达部位在输尿管芽或远曲小管、连接小管、皮质集合管上皮细胞胞浆内.②Western blotting检测结果:胚龄12 d钙结合蛋白D28k表达量极低,无法检测.胚龄14 d到胚龄16 d,钙结合蛋白D28k表达量增加[(12.099 4±0.691 1),(13.238 3±0.172 9),P<0.01].胚龄16 d与胚龄18 d钙结合蛋白D28k表达量无显著性差异.胚龄18 d到生后7 d钙结合蛋白D28k表达量明显增加[(13.844 7±0.238 5),(15.271 8±0.201 9),(16.320 8±0.283 9),(19.338 3±0.404 4),P<0.01].生后7 d到生后14 d,钙结合蛋白D28k表达量减弱,差异有显著性意义[(19.338 3±0.404 4),(15.891 5±1.018 5),P<0.01].生后14 d到生后40 d钙结合蛋白D28k表达量差异无显著性.结论:在小鼠肾脏发育中,钙结合蛋白D28k在胚龄12 d胎鼠肾脏输尿管芽微弱表达,随胚(日)龄增加其表达逐渐增加,生后7 d达最大水平,并定位于远曲小管、连接小管和皮质集合管.此后表达减弱并趋于平稳.钙结合蛋白D28k表达部位在输尿管芽或远曲小管、连接小管、皮质集合管上皮细胞胞浆内.