摘要:
目的:观察以琼脂凝胶球为载体的吸附剂对血浆中多余免疫球蛋白E的清除效果.方法:实验于2002-04/2004-09在南开大学完成.①高免疫球蛋白E患者血清由天津市长征医院免疫室提供.琼脂粉(北京益利精细化学品有限公司,批号20000810).环氧氯丙烷(天津津达精细化学品厂,批号20010502).②以20~40目的琼脂凝胶微球为载体,经环氧氯丙烷活化,键联配基色氨酸及手臂制得免疫球蛋白E免疫吸附剂,进行体外静态吸附测试.吸附结果采用酶标法免疫球蛋白E试剂盒检测.③连接手臂的琼脂-色氨酸吸附剂进行血液相容性测试,检测吸附前后血清中免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、免疫球蛋白A以及C3,C4含量的变化.全自动血球计数分析仪检测白细胞、红细胞、血小板数目的变化.结果:①不同配基对吸附剂吸附效果的影响:琼脂凝胶载体连接色氨酸配基后对免疫球蛋白E的吸附性能最好,对其吸附主要是一种非极性作用力.②不同缓冲体系及pH值对吸附效果的影响:pH=5~6的范围内色氨酸的饱和溶解度最低,键联量也很低.pH=6~8的磷酸盐缓冲体系,磷酸根离子参与环氧基的开环反应,降低载体的活化效率,同时可键联的活性氨基酸配基的量也相应减少.Tris-HCI和碳酸钠-碳酸氢钠缓冲体系,对色氨酸的饱和溶解度也不是很高.相对来说,pH=7~8的硼酸-硼砂缓冲体系效果较好.③不同手臂对吸附剂吸附效果的影响:与连接前比较,连接丁二酸酐、邻苯二甲酸酐手臂后的吸附剂对免疫球蛋白E的吸附能力均有所提高(56.02%,68.00%,60.87%).④以色氨酸为配基、丁二酸酐为手臂的琼脂凝胶吸附剂吸附动力学实验:吸附剂在37℃对免疫球蛋白E的吸附率为70.73%.⑤吸附剂的血液相容性实验结果:经过2 h的体外全血静态吸附后,吸附剂对5种组分的吸附率为免疫球蛋白A>免疫球蛋白G>C4>C3>免疫球蛋白M,而对最大的免疫球蛋白A的吸附率也仅为26.17%,远低于对免疫球蛋白E的吸附率70.73%.吸附剂对全血细胞有一定的破坏性,静态吸附2 h后,白细胞下降27.3%,红细胞下降2,4%,血小板下降6.9%.结论:以琼脂凝胶微球载体,通过交联、活化和固定配基色氨酸成功制备免疫球蛋白E免疫吸附剂.此吸附剂对免疫球蛋白E有较高的清除率,同时具备较好的血液相容性,适用于临床血液灌流治疗支气管哮喘疾病.