β-巯基乙醇在大鼠骨髓基质细胞向神经干细胞诱导分化中的作用

• 作者: 周艳 李大宁 李淑波 潘安娜 鞠文博
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓基质细胞 碱性成纤维细胞生长因子 分裂
• 年，卷（期）: 2007,（20）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 3991-3993
• 页数: 3页
• 分类号: R394.2
• 字数: 4381字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.20.037

摘要

目的:探讨骨髓基质细胞诱导分化为神经干细胞的更佳培养液组成.方法:实验于2005-10/2006-08在省级实验室北华大学医学院实验中心完成.①实验材料:体质量120～160 g的Wistar大鼠,由北华大学动物中心提供.②实验方法:取120～160 g大鼠3只,体外分离培养大鼠骨髓基质细胞.培养约14 d,待原代细胞贴满培养瓶,呈成纤维细胞样生长,用0.25%胰蛋白酶消化原代细胞约3 min,在倒置显微镜下见贴壁细胞基本收缩成类圆形后,加入含胎牛血清的DMEM培养液终止消化,并将细胞液吹打均匀,以1×107L-1接种于2个细胞培养瓶中进行1:2传代扩增培养.在传代培养细胞培养液中加入神经细胞诱导剂,选取生长良好的2,3,4代细胞进行实验.取第5代培养细胞,以8×103/cm2接种于预铺有盖玻片3.5 cm培养皿中制备细胞爬片,每孔加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养液2 mL,达80%融合时更换新鲜培养液,并在培养液中加入1 mmol/L β-巯基乙醇,诱导24 h,磷酸盐缓冲液洗涤,换成含1 mmol/L/L β-巯基乙醇的无血清培养液,5 h后更换为改良神经细胞培养液,并设立未加入含β-巯基乙醇培养液的为对照.利用免疫组织化学方法检测神经元特有巢蛋白.结果:①培养的骨髓基质细胞形态学变化:接种初期,细胞贴壁生长是以分散的、克隆集落方式增殖,细胞呈圆形漂浮于培养液中,培养10 d后,细胞形态基本为纺锤形的成纤维细胞样,偶有宽大扁平的多边形细胞,细胞逐渐长出小突起,出现出芽现象,14～20 d后,突起细胞增多,突起延长并相互连接成网,具有神经细胞形态特征.②免疫组织化学染色检测神经元特有巢蛋白:1周左右,细胞可表达巢蛋白阳性,细胞大而圆,呈棕褐色,经培养诱导分化2周后的长突起细胞,表达神经元特异性抗原巢蛋白阳性细胞互相成网状连接.实验组第4代90%细胞巢蛋白阳性,在荧光显微镜下细胞发黄绿荧光,对照组第1代细胞约30%细胞呈巢蛋白阳性,荧光弱.结论:在诱导培养液中加入β-巯基乙醇,可明显促进骨髓基质细胞的分化,并可获得神经干细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鞠文博	北华大学医学院组织学和胚胎学教研室	18	88	5.0	8.0
2	周艳	北华大学医学院组织学和胚胎学教研室	16	68	4.0	7.0
3	李淑波	北华大学医学院组织学和胚胎学教研室	14	41	4.0	5.0
4	潘安娜	北华大学医学院组织学和胚胎学教研室	6	22	2.0	4.0
5	李大宁	北华大学医学院组织学和胚胎学教研室	5	10	2.0	2.0