血管内皮生长因子C靶向RNA干扰重组载体的构建和效应检测

• 作者: 亢春彦 周慧聪 张艳 李继昌
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: RNA,小分子干扰:血管内皮生长因子C 组织构建
• 年，卷（期）: 2007,（32）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 6379-6382
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4897字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.32.008

摘要

目的:构建针对人血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体,并观察其在胃癌细胞中的干扰效果.方法:实验于2006-02/2007-02在河南省分子医学重点学科开放实验室完成.①实验材料:小干扰RNA表达载体pSilencer3.1为美国Ambion公司产品;胃癌细胞SGC7901为河南省分子医学重点学科开放实验室保存;血管内皮生长因子C基因的干扰片断和聚合酶链反应引物(152 bp)由上海生工生物公司合成.②实验过程:根据pSilencer3.1-H1载体要求设计靶向血管内皮生长因子C基因的两对小干扰RNA,退火后连接入载体相应位点,构建重组表达质粒.经酶切和测序鉴定后分别转染胃癌细胞株SGC-7901,经G418筛选,获得稳定表达的细胞株.③实验评估:采用反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测血管内皮生长因子C mRNA和蛋白水平的表达.结果:①重组质粒的酶切、核苷酸序列分析结果:经酶切和测序鉴定证实成功构建了血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体,建立了稳定转染细胞株.②稳定转染的细胞株中血管内皮生长因子C mRNA和蛋白表达:反转录-聚合酶链反应和Western blot显示转染后血管内皮生长因子C表达与对照组相比有不同程度的降低,以pSilencer3.1-neo-VEGF-C1尤为明显,抑制血管内皮生长因子C表达,不影响细胞的生长.结论:成功构建了血管内皮生长因子C小于扰RNA表达载体及稳定转染的胃癌细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李继昌	郑州大学第一附属医院消化内科	110	563	12.0	16.0
2	张艳	郑州大学基础医学院药理教研室	344	1424	18.0	23.0
3	周慧聪	郑州大学第一附属医院消化内科	11	26	3.0	5.0
4	亢春彦	河南省职工医学院病理教研室	2	7	2.0	2.0