荧光染色法分析17β-雌二醇对获能人精子细胞顶体反应及细胞外Ca2+和蛋白激酶C抑制剂的影响

• 作者: 何彦芳 王嵘 郑洁
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 17β-雌二醇 人精子 顶体反应 顶体酶
• 年，卷（期）: 2007,（37）
• 所属期刊栏目: 细胞工程相关实验
• 页码范围: 7421-7424
• 页数: 4页
• 分类号: R321.1
• 字数: 5771字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.37.032

摘要

目的:精子细胞功能受雌激素的调节,雌激素能促进精子蛋白酪氨酸磷酸化、获能和顶体反应,从而增强精子的受精能力.但有关雌激素诱导精子细胞发生顶体反应的信号途径尚未阐明.本实验于体外观察雌激素对人精子细胞顶体反应的影响,并初步探讨其可能的作用途径.方法:实验于2006-07/2007-04在成都医学院科研中心实验室完成.实验材料:实验所用49份精液标本来自年龄25～45岁、有正常生育史、身体健康的成年男性志愿者,其精液常规各项指标符合WHO制定的正常精液常规标准.实验方法:①应用FITC-PSA荧光染色法分析精子顶体反应率,以分光光度比色法测定顶体酶活性,观察雌激素类活性物质17β-雌二醇对获能人精子细胞顶体反应和顶体酶活性的影响.②取9份上游后精子细胞悬液,每份均分为2份,分别用含钙获能液(1 mmol/LCa2+)和无钙获能液(0 mmol/L Ca2+)调整密度.再将2份精子悬液均分为17β-雌二醇作用组和对照组,观察胞外钙离子对17β-雌二醇诱导顶体反应的影响.③取9份获能精子细胞悬液,每份均分为17β-雌二醇作用组、蛋白激酶C抑制剂作用组、17β-雌二醇+蛋白激酶C抑制剂作用组和空白对照组,观察蛋白激酶C抑制剂对17β-雌二醇诱导顶体反应的影响.④取10份获能精子细胞悬液,每份均分为17β-雌二醇作用组、雌二醇-牛血清白蛋白交联作用组和空白对照组.观察非透膜性大分子物质雌二醇-牛血清白蛋白交联物对人精子细胞顶体反应的影响.⑤采用流式细胞术检测精子膜雌激素受体,以初步探讨雌激素对人精子细胞顶体反应影响的作用途径.结果:①17β-雌二醇可促进精子细胞顶体反应,并增强精子细胞顶体酶的活性.②去除培养液中的Ca2+后,17β-雌二醇不能诱导精子细胞发生顶体反应.③蛋白激酶C抑制剂能明显降低17β-雌二醇所诱导的顶体反应.④雌二醇-牛血清白蛋白交联物亦能够促进精子细胞发生顶体反应,其作用与游离雌二醇无明显差异.⑤流式细胞仪检测显示,E2-BSA-FITC(异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白-雌二醇复合物)处理组和BSA-FITC(异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白)对照组间荧光强度均值差异有统计学意义.结论:雌激素对人精子细胞顶体反应有一定的促进作用,其作用途径之一可能是通过增强精子顶体酶活性来实现,此过程涉及了胞外Ca2+、蛋白激酶C及精子膜上的雌激素受体或雌激素结合位点的参与.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王嵘	青海大学医学院生物化学教研室	27	84	5.0	8.0
2	何彦芳	成都医学院病理学教研室	16	102	6.0	10.0
3	郑洁	绵阳中心医院检验科	4	7	2.0	2.0