人血管生成素1的克隆、序列分析和单酶切法构建毕氏酵母表达载体

• 作者: 刘丽波 刘学政 范海鹰 马腾
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 血管生成素1 逆转录聚合酶链反应 克隆,分子 序列分析
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 1041-1044,1048
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 5530字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.06.012

摘要

目的:从人胎盘中克隆血管生成素1基因,并分析其结构特征,单酶切法构建毕氏酵母表达载体pPlC9K/Ang-1,为进一步研究血管生成素1防治糖尿病视网膜病变的血管渗漏奠定物质基础.方法:实验于2003-11/2004-06在北京大学医学部细胞系完成.提取人胎盘组织总RNA,用反转录聚合酶链式反应技术扩增出血管生成素1基因片段,并将其克隆到PGEM-T Easy载体中进行序列分析,用小牛肠碱性磷酸酶法去除线性化的pPIC9K质粒DNA两端磷酸基,以防止质粒自身环化,再亚克隆到毕氏酵母表达载体pPlC9K中.结果:①经甲醛变性胶电泳鉴定,成功从胎盘组织中提取出总RNA,RNA的完整性和纯度符合进一步的酶反应要求.②胎盘组织总RNA经oligo-dT引物反转录,用人血管生成素1特异一对引物进行聚合酶链反应扩增,10 g/L琼脂糖胶电泳结果显示一条特异片段,大小为1 5kb cDNA片段.③成功构建了PGEM-T/Ang-1载体,Blast序列分析与GenBank中AY121504一致.两者成熟区cDNA的核苷酸和氨基酸同源性分别大于99%和98%,国人血管生成素1基因核苷酸序列的起始密码子ATG,终止密码子为TGA,共1 497个碱基对.④成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体.结论:从人的胎盘中克降血管生成素1基因无突变,成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,满足表达蛋白质的需要.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马腾	辽宁医学院解剖教研室	3	24	2.0	3.0
2	刘丽波	中国医科大学神经生物学教研室	45	181	8.0	11.0
3	刘学政	辽宁医学院解剖教研室	118	564	13.0	17.0