核因子κBp65特异性小干涉核糖核酸抑制肿瘤坏死因子α诱导大鼠关节滑膜细胞中一氧化氮合酶2和环氧合酶2的表达

• 作者: 曾红 朱文艺 王佩燕 王虹虹 申新国
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: NF-κB RNA小分子干扰 肿瘤坏死因子α 滑膜 一氧化氮合酶 组织构建
• 年，卷（期）: 2007,（27）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 5295-5298
• 页数: 4页
• 分类号: R684.3
• 字数: 5353字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.27.010

摘要

目的:利用核因子κBp65特异性小干涉核糖核酸抑制肿瘤坏死因子α诱导的关节滑膜细胞中一氧化氮合酶2和环氧合酶2的表达,探讨基因治疗类风湿性关节炎的新方法.方法:实验于2005-03/2006-03在北京大学医学部中心实验室(国家级)完成.①实验材料:清洁级健康近交系SD大鼠10只;一氧化氮合酶2,环氧合酶2,3-磷酸甘油醛脱氢酶引物(由北京奥科生物公司合成);肿瘤坏死因子α(Sigma公司);核因子κBp65特异性小干涉核糖核酸和转染条件由北京大学运动医学研究所陈连旭博士提供.②实验干预:切取大鼠髋关节和膝关节的滑膜体外培养滑膜细胞.利用脂质体siPORTTM Lipid将核因子κBp65特异性小干涉核糖核酸转染滑膜细胞,再加入肿瘤坏死因子α刺激.阴性对照为任意编码的小干涉核糖核酸,阳性对照为针对3-磷酸甘油醛脱氢酶的小干涉核糖核酸.③实验评估:提取滑膜细胞中的核蛋白,利用电泳迁移率试验检测核因子κB的活性;提取滑膜细胞的核糖核酸和总蛋白,利用反转录聚合酶链反应和蛋白质免疫印记法从信使核糖核酸和蛋白质两水平检测一氧化氮合酶2和环氧合酶2的表达.结果:①肿瘤坏死因子α和核因子κBp65特异性小干涉核糖核酸对核因子κB转录活性的影响:与正常滑膜细胞相比,肿瘤坏死因子α可以显著提高核因子κB的结合能力,而事先转染小干涉核糖核酸48 h,再用肿瘤坏死因子α刺激,核因子κB的结合能力又显著降低.②核因子κBp65特异性小干涉核糖核酸对核因子κB下游因子的影响:在培养的滑膜细胞中,肿瘤坏死因子α可以显著增加一氧化氮合酶2和环氧合酶2的表达;在转染小干涉核糖核酸抑制核因子κBp65的表达后再用肿瘤坏死因子α刺激,一氧化氮合酶2和环氧合酶2的表达被抑制.结论:①核因子κBp65特异性小干涉核糖核酸可降低肿瘤坏死因子α诱导的滑膜细胞中核因子κB的转录活性,抑制其下游因子一氧化氮合酶2和环氧合酶2的表达.②核因子κBp65特异性小干涉核糖核酸可用于基因治疗类风湿性关节炎的试验研究.