大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法的改进

• 作者: 李晓文 李树基 田映红 高天明
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 缺氧模型 海马神经元 培养 凋亡
• 年，卷（期）: 2007,（15）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2810-2813
• 页数: 4页
• 分类号: R742.1
• 字数: 5332字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.15.003

摘要

目的:改进培养大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法,并通过兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂进行验证.方法:实验于2004-09/2005-06在南方医科大学基础医学院神经生物学教研室进行.实验材料:出生1 d内清洁级SD大鼠,由南方医科大学实验动物中心提供(合格证号为粤证监字2004B023号).N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂5-甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸(MK-801)和D-2-氨基-5-磷酰基戊酸(d-APV)购自Sigma公司.实验方法:取新生1 d SD大鼠海马组织作神经细胞分散细胞原代培养,培养到13 d时进行氧/葡萄糖剥夺模型的制备:将neurobasal培养基更换为不含葡萄糖的BSSo培养基,连续充以50 mL/L CO2+950 mL/L N2(体积比)混合气体.缺氧30,45,60,90 min后取出细胞,更换为正常neurobasal培养基,恢复正常条件继续培养.将神经细胞随机分为正常对照组、单纯缺氧组、无糖缺氧组、MK-801组和d-APV组.将10 μmol/L MK-801和500 μmol/L d-APV在通50 mL/L CO2+950 mL/L N2混合气前加入到BSSo培养基,缺氧结束后随BSSo培养基一起去掉.复氧24 h后采用MTT比色法测神经细胞成活率及Hoechst荧光染料法测神经细胞凋亡率.结果:①随着氧/葡萄糖剥夺时间延长,神经细胞存活率下降.氧/葡萄糖剥夺30,45,60,90 min再复氧24 h,神经细胞存活率分别为(81.48±3.84)%、(63.14±3.14)%、(41.73±2.97)%和(16.78±2.12)%.②N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK-801(10 μmol/L)和d-APV(500 μmol/L)均能明显增加神经细胞存活率(P＜0.05),并且两组细胞存活率与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:实验制备的海马神经细胞短时间氧/葡萄糖剥夺模型可对神经细胞造成迟发性死亡,兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂可保护氧/葡萄糖剥夺诱导的神经细胞损伤,说明本实验建立的缺氧模型有效并简便可靠,并且缩短了缺氧时间.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高天明	南方医科大学基础医学院神经生物学教研室	44	277	9.0	16.0
2	李晓文	南方医科大学基础医学院神经生物学教研室	28	147	8.0	11.0
3	李树基	南方医科大学基础医学院神经生物学教研室	23	82	5.0	8.0
4	田映红	南方医科大学基础医学院生理教研室	13	39	3.0	6.0