摘要:
背景:以往的研究发现,感染性脑损伤时脑组织中白细胞介素1和肿瘤坏死因子α含量明显增加,并与脑损害呈正相关关系,其能否导致血脑屏障通透性增高?目的:观察肿瘤坏死因子α对体外血脑屏障模型通透性的影响及其可能的调控机制.设计:体外细胞模型对照实验.单位:中南大学湘雅医院儿科,中南大学湘雅医学院生化系.材料:选用20只生后7 d健康SD大鼠,雌雄不拘,清洁级,由中南大学湘雅医学院动物部提供;肿瘤坏死因子α购自sigma公司;DMEM液体培养基、胎牛血清购自Hyclone;Rhok的特异性拮抗剂Y-27632购自Alexis公司,兔抗人Ⅷ因子相关抗原购自Zymed公司;小鼠抗大鼠神经胶质纤维酸性蛋白单抗(GFAP)购自Neomarkers公司.方法:实验于2004-03/2005-04在中南大学湘雅医院完成.利用脑微血管内皮细胞与星型胶质细胞共培养建立体外大鼠血脑屏障模型,共培养至10 d开始干预,实验分为模型组、Y-27632对照组、肿瘤坏死因子α干预组和Y-27632预处理组.模型组仅给予血脑屏障模型制备,肿瘤坏死因子α干预组向血脑屏障模型内加入肿瘤坏死因子α 0.01 g/L干预5 h;Y-27632预处理组指向血脑屏障模型内加入Y-27632 30μmol/L预处理1 h后,再予肿瘤坏死因子α 0.01 g/L干预5 h,Y-27632对照组造模后仅加入Y-27632干预,方式同Y-27632预处理组.取分组处理后待用模型,分别于30,60,120,240 min采用γ计数仪检测125I-牛血清白蛋白的通透量观察肿瘤坏死因子α对血脑屏障通透性的影响.主要观察指标:各组干预后不同时间点体外大鼠血脑屏障模型对125I-牛血清白蛋白的通透量.结果:处理后30,60,120,240 min,肿瘤坏死因子α干预组体外血脑屏障模型125I-BSA通透量均高于其他组别(P<0.01),240 min时达高峰;处理后30,60 min,Y-27632预处理组125I-BSA通透量低于肿瘤坏死因子α干预组(P<0.01),表现出拮抗肿瘤坏死因子α的作用,自120 min后,Y-27632预处理组与Y-27632对照组比较,差异也有显著性意义(P<0.05).结论:肿瘤坏死因子α可导致血脑屏障通透性增高,Y-27632预处理能早期逆转肿瘤坏死因子α对血脑屏障通透性的影响.