树突状细胞CD80和CD86表达及胞外白细胞介素12分泌与不同剂量青藤碱干预的影响

• 作者: 周晨慧 徐道华
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 青藤碱 树突状细胞 白细胞介素12 类风湿性关节炎
• 年，卷（期）: 2007,（28）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5654-5656
• 页数: 3页
• 分类号: R593.22
• 字数: 1504字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.28.017

摘要

背景:青藤碱是从抗风湿中药青风藤中分离提取的单体生物碱,具有抗炎、镇痛、免疫抑制等药理作用,该药用于治疗类风湿性关节炎等风湿性疾病具有较明确的疗效,在临床上得到了广泛的应用.树突状细胞是目前所知的机体内功能最强的抗原提呈细胞.目的:观察不同剂量青藤碱对树突状细胞CD80和CD86表达及胞外白细胞介素12分泌的影响.设计:重复测量实验.单位:广东医学院药理教研室.材料:实验于2004-09/2005-05在解放军第三军医大学全军免疫学研究所完成.健康志愿者外周血由西南医院血库提供.青藤碱由湖南正清药业有限公司提供.RPMI1640培养基购于Hyclone公司,FITC标记的单克隆抗体CD60、CD86、鼠免疫球蛋白亚型IgG1均购于eBioscience公司,重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,重组人白细胞介素4,肿瘤坏死因子α购于PE公司.人白细胞介素12 ELISA试剂盒购于法国Diaclone公司.方法:取健康志愿者外周血稀释,培养,按重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子1×106 U/L、重组人白细胞介素45×105U/L终浓度加入细胞因子,培养7 d后可获得树突状细胞.①将常规培养7 d后的树突状细胞调整细胞浓度为2×108L-1,加入6孔培养板,分别加入青藤碱使其终浓度为3,10,30 mg/L以及肿瘤坏死因子α使其终浓度为10μg/L,同时设对照组,于第9天分别收集悬浮细胞,每管取2×105细胞,用PBS洗涤2次,加入20μL FITC标记的CD80或CD86,对照管则加入鼠免疫球蛋白亚型IgG1,4℃避光孵育30 min,充分洗涤后,10 g/L多聚甲醛固定,将细胞悬液在流式细胞仪上进行分析.②将常规培养7 d后的树突状细胞调整细胞浓度为2×108L-1,加入6孔培养版,分别加入青藤碱使其终浓度为3,10,30 mg/L以及肿瘤坏死因子α使其终浓度为10μg/L,同时设对照组,继续培养48 h后,收集上清进行白细胞介素12测定.白细胞介素12的检测采用夹心ELISA法检测胞外的白细胞介素12分泌量,按试剂盒说明操作.主要观察指标:①不同剂量青藤碱对树突状细胞表面CD80及CD86表达的影响.②不同剂量青藤碱对树突状细胞分泌白细胞介素12的影响.结果:①树突状细胞表面CD80及CD86表达:不同剂量青藤碱组与对照组树突状细胞表面CD80分子阳性表达率及平均荧光强度差异无统计学意义(P＞0.05),各组细胞表面CD86分子阳性表达率及平均荧光强度差异亦无统计学意义(P＞0.05).②各组树突状细胞分泌白细胞介素12水平检测结果:由ELISA测量值可见,青藤碱小、中、大剂量组树突状细胞白细胞介素12水平分别为(863.1±33.7),(668.8±31.9),(512.6±29.6)ng/L,高于对照组[(922.2±36.6),P＜0.05-0.01],随青藤碱剂量增大,抑制树突状细胞分泌白细胞介素12水平呈依赖性减少.结论:青藤碱可剂量依赖性地抑制树突状细胞分泌白细胞介素12,而对树突状细胞表面CD80和CD83表达无明显影响;青藤碱的抗类风湿作用可能与其抑制树突状细胞分泌白细胞介素12有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐道华	广东医学院药理教研室	25	179	8.0	12.0
2	周晨慧	广东医学院药理教研室	25	180	6.0	12.0