重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳酸链球菌表达载体的构建

• 作者: 张振书 杨晓强 武金宝 陈学清 马高峰
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,重组/遗传学 链球菌属 基因表达 遗传/载体
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 干细胞临床应用相关实验
• 页码范围: 527-529,533
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4298字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.03.040

摘要

目的:构建重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳酸链球菌表达载体,为进一步研究人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在乳链菌的表达及其治疗价值奠定基础.方法:实验于2005-04/2006-03在南方医科大学南方医院消化病研究所完成.①载体pNCSF的构建:将质粒集落刺激因子及含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBC1000质粒分别加入BamH Ⅰ和Pst Ⅰ进行双酶切,并用Apa Ⅰ、Sac Ⅰ进行双酶切鉴定,重组质粒命名为pNCSF.②SDGFP的TA克隆及载体pNCSFGFP的构建:将经过优化适合在乳链菌表达的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因克隆于含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBC1000载体,得到重组质粒pNCSF;同时设计上下游引物经PCR扩增增强荧光表达蛋白(EGFP),TA克隆后经测序验证,再连接于p NCSF获得重组质粒pNCSFGFP.③载体pTRCSF、pTRCSFGFP的建立:将获得的pNCSF和pNCSFGFP进一步克隆于穿梭载体pTR1001c,以获得人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳链菌表达载体pTRCSF及pTRCSFGFP.结果:①载体pNCSF构建结果:酶切鉴定产物经1.0%的琼脂糖凝胶电泳后,发现有(含启动子P59、信号肽USP45、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)720 bp的目的片段.②SDGFP的TA克隆及载体pNCSFEGFP的构建结果:SDGFP阳性克隆产物经EcoR Ⅰ酶切鉴定得到775 bp目的片段.pNCSFEGFP酶切鉴定产物经1.0%的琼脂糖凝胶电泳后,发现有(含启动子P59、信号肽USP45、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、SDGFP)1 495 bp的目的片段.③穿梭质粒pTRCSF、pTRCSFGFP酶切鉴定结果:经Xba Ⅰ、SacⅠ进行双酶切鉴定,分别得到约717 bp、1 492 bp大小目的片段.结论:获得了人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳链菌表达载体pTRCSF及pTRCSFGFP,并经酶切鉴定和测序证实.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张振书	南方医科大学南方医院消化内科	57	191	8.0	10.0
2	陈学清	南方医科大学南方医院消化内科	16	88	6.0	9.0
3	马高峰	南方医科大学南方医院消化内科	5	20	2.0	4.0
4	杨晓强	南方医科大学南方医院消化内科	11	27	3.0	4.0
5	武金宝	南方医科大学南方医院消化内科	20	86	6.0	7.0