大鼠羊膜上皮细胞植入损伤脊髓后的存活与迁移

• 作者: 娄小倩 孟晓婷 曲得伟 王大伟 薛辉 陈东
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 羊膜 上皮细胞 脊髓损伤 细胞存活
• 年，卷（期）: 2007,（15）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 2994-2996,3000
• 页数: 4页
• 分类号: R651.21
• 字数: 1025字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.15.029

摘要

背景:有研究表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原,且可以分泌多种神经营养因子及递质,如果羊膜上皮细胞用于代替神经细胞,其神经营养作用必将为治疗脊髓损伤和神经退行性病变带来广阔前景.目的:观察大鼠羊膜上皮细胞移植人损伤脊髓后的存活、迁移及分泌情况.设计:观察实验.单位:吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室.材料:选用1只孕12～14 d及18只成年雄性Wistar大鼠,体质量300～350 g,由吉林大学实验动物中心提供.免疫组织化学染涂色试剂:小鼠抗大鼠溴核苷脱氧嘧啶单克隆抗体购自Sigma公司;兔抗大鼠神经营养素-3多克隆抗体和兔抗大鼠BDNF多克隆抗体(博士德公司);SP免疫组织化学染色试剂盒购自迈新公司.方法:实验于2005-07/10在吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室完成.①大鼠脊髓损伤模型的建立:大鼠麻醉后,分离皮下组织肌肉,用咬骨钳咬除棘突及椎板,暴露脊髓,用止血钳以一扣力度钳夹脊髓全截面3 min,青霉素涂撒创口,缝合肌肉皮肤.术中根据需要吸入乙醚麻醉,1周后移植.②羊膜上皮细胞的获取和培养:取孕12～14 d的Wistar大鼠胎盘剪成1 mm×1 mm×1 mm的组织块,经消化培养后,机械吹打使其成为单细胞悬液接种于培养瓶中.③羊膜上皮细胞移植人损伤脊髓:切开原创口,暴露损伤脊髓,将5μL羊膜上皮细胞悬液以1×1012 /L的浓度用微量注射器在距损伤处上缘3 mm处注入,注入时间为3 min,停针5 min后缓慢拔出,缝合肌肉、皮肤.④取材及免疫组织化学分析:分别于羊膜上皮细胞移植人1,3周后取材,即室温下40 g/L多聚甲醛灌流固定后在PBS缓冲液中浸泡20 min,4℃下一抗孵育过夜,二抗生物素化抗小鼠或兔lgG 37℃孵育20 min,辣根过氧化物酶标记的三抗于37℃孵育20 min,0.2 g/L二甲基联苯氨显色或AEC显色.主要观察指标:羊膜上皮细胞移植入损伤脊髓1,3周后的存活、迁移及分泌情况.结果:羊膜上皮细胞移植1周后,羊膜上皮细胞仍多聚于软脊膜下,可见阳性细胞核;羊膜上皮细胞移植3周后,羊膜上皮细胞迁移更加广泛,中央管及周围灰质中有大量阳性细胞;同时可观察到在损伤脊髓中移植的羊膜上皮细胞能够表达神经营养素3,表现为显红色的阳性细胞和脑源性神经营养因子.结论:羊膜上皮细胞在大鼠损伤脊髓内能够至少存活3周并有广泛迁移,此外还能够分泌神经营养因子脑源性神经营养因子和神经营养素3.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王大伟	吉林大学第二临床医学院	55	196	9.0	11.0
2	陈东	广东医学院组织与胚胎学教研室	89	447	10.0	16.0
3	孟晓婷	吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室	30	340	9.0	18.0
4	薛辉	吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室	21	99	5.0	9.0
5	娄小倩	吉林大学第二临床医学院	5	13	2.0	3.0
6	曲得伟	吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室	1	2	1.0	1.0