中国人胚胎肝组织来源纤溶酶原kringle5基因的克隆与序列分析

• 作者: 曾征宇 燕启江 甘舜进 胡朝晖 陈广南
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 纤维蛋白溶酶原 克隆,生物 序列分析 组织构建
• 年，卷（期）: 2007,（38）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 7655-7657
• 页数: 3页
• 分类号: R333.4
• 字数: 3412字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.38.016

摘要

目的:分离、克隆和测定中国人纤溶酶原Kringle5功能区基因,为进一步研究其功能奠定基础.方法:实验于2002-06/2003-05在广州医学院金域医学检验中心完成.①实验材料:国人胚肝组织取自广州医学院第一附属医院的流产胚胎(取得家属同意,并经广州医学院第一附属医院伦理委员会批准).pET21a(+)载体购自Novagen公司,大肠杆菌BL21(DE3)为医学检验中心保存.引物均由上海生工合成.②实验方法:从国人胚肝组织中提取mRNA,用反转录-聚合酶链反应方法将人纤溶酶原Kringle5的cDNA扩增出来,克隆到pET21a(+)载体中测序.③实验评估:采用紫外分光光度仪和琼脂糖凝胶电泳分析胚肝组织总RNA的抽提结果;经琼脂糖凝胶电泳鉴定Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果;pET-Kringle5重组质粒的酶切鉴定;序列测定.结果:①胚肝组织提取总RNA结果:提取的总RNA经紫外分光光度仪测得A260nm/A280nm＞1.8,A260nm/A270nm＞1.2,表明无蛋白残留;电泳结果显示提取的总RNA有明显的28 S、18 S两条带,说明RNA基本完整.②Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果:人Kringle5 cDNA片段长为240 bp,加上引物设计的2个酶切位点,总长度为258 bp,聚合酶链反应产物长度与该长度一致,符合预期结果.③pET-Kringle5重组质粒的构建和酶切鉴定结果:用引物所带的限制性内切酶BamH I、Nde I双酶切,结果有250 bp左右条带出现.④序列测定结果:证实国人纤溶酶原Kringle5功能区基因被成功克隆,序列分析证实为该基因,未发现有基因突变或多态性现象,但第153位核苷酸与文献比较存在碱基替代现象,其组成的密码子由于遗传的简并性,所编码的氨基酸相同,并未造成氨基酸组成的改变.结论:中国人纤溶酶原Kringle5功能区cDNA基因编码序列与国外文献报道的相应序列可能存在碱基替代现象.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡朝晖	广州医学院金域医学检验中心	10	57	3.0	7.0
2	燕启江	广州医学院金域医学检验中心	14	77	5.0	8.0
3	曾征宇	广州医学院金域医学检验中心	3	1	1.0	1.0
4	陈广南	广州医学院金域医学检验中心	3	1	1.0	1.0
5	甘舜进	北京潞河医院心内科	1	0	0.0	0.0