高压氧对脑源性神经干细胞分化的影响

• 作者: 彭争荣 王素娥 肖平田
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 高压氧 脑源性神经营养因子 细胞分化 缺氧缺血:脑
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 427-430,后插页2
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 5843字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.03.009

摘要

目的:探讨高压氧对缺血缺氧脑源性神经干细胞模型向神经元细胞分化的影响.方法:实验于2006-01/05在中南大学湘雅医院神经病学实验室完成.YLC 0.5/1A型动物实验高压氧舱(湖北武汉).①实验选取清洁级SD新生鼠10只,无菌条件下分离脑组织,克隆传代培养脑源性神经干细胞.将第3代细胞制成单细胞悬液,分装在不同的25 mL培养瓶中,分为正常对照组、模型对照组、高浓度氧组、高气压组、高压氧组,1瓶/组.②除正常对照组外,其余各组均复制神经干细胞缺血缺氧模型.当培养的神经干细胞达80%融合时换为新鲜的完全培养基,次日将培养基弃去,换用新鲜的无血清DMEM/F12培养基,并将细胞置于体积分数为0.93的N2、0.05的CO2、0.02的O2培养箱中37 ℃培养,3 h后用于相关指标检测.③从每组取1 mL细胞悬液移入96孔酶标板,在酶联免疫检测仪490 nm波长处测定各孔吸光度值,检测神经干细胞活力.④将各组神经干细胞悬液接种于盖玻片上涂有多聚赖氨酸的培养皿中,Nestin免疫荧光染色后加入去除生长因子的血清DMEM/F12培养基,各组在不同条件下继续培养:高气压组培养皿置于高压氧动物舱内,采用压缩空气给予0.2MPa压力1 h(加、减压时间各15 min,稳压30 min),1次/d,连续7 d;高压氧组在高气压组基础上,稳压时舱内氧浓度保持在80%以上;高浓度氧组不加压,只保持舱内氧浓度在80%以上;正常对照组和模型对照组在加入去除生长因子的血清DMEM/F12(含体积分数为0.2的胎牛血清)中培养7 d进行诱导分化.各组神经干细胞进行特异免疫荧光染色,观察细胞分化情况.⑤采用显微镜在200倍视野下进行细胞计数,每组观察10张盖玻片,每张盖玻片观察6个不重复视野,计算各组神经干细胞分化为神经元及胶质细胞的百分率.结果:①造模后神经干细胞活力的观察:与正常对照组比较,模型对照组、高浓度氧组、高气压组、高压氧组神经干细胞复制缺血缺氧模型后吸光度值均明显下降(t=-4.357,P＜0.05),表明神经干细胞经缺血缺氧后数目减少,生长活力下降.②脑源性神经干细胞诱导分化情况:诱导分化3 d后,各组微管相关蛋白2免疫细胞化学染色可见神经元样细胞,胶质原纤维酸性蛋白免疫细胞化学染色可见星形胶质样细胞,半乳糖脑苷脂免疫细胞化学染色可见少突胶质样细胞.③各组神经干细胞分化结果比较:高压氧组神经元及胶质细胞分化率较正常对照组基本相似(t=0.324,P＞0.05),但神经元分化率明显高于模型对照组、高浓度氧组、高气压组(t=2.667～5.424,P＜0.05),胶质细胞分化率低于此3组(t=-5.424～-2.667,P＜0.05).结论:高压氧处理能够上调脑源性神经干细胞向神经元分化的比例.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王素娥	中南大学湘雅医院高压氧科	41	620	15.0	23.0
2	肖平田	中南大学湘雅医院高压氧科	57	338	11.0	16.0
3	彭争荣	中南大学湘雅医院高压氧科	39	255	10.0	14.0