人骨髓间充质干细胞分离培养及血管内皮生长因子对其产生的诱导分化作用

• 作者: 刘亢丁 文佳媚 王培蕊 王心蕊 陈柏竹 马学玲
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 血管内皮生长因子 脑缺血 基因转染
• 年，卷（期）: 2007,（46）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 9250-9254
• 页数: 5页
• 分类号: R743
• 字数: 6828字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.46.010

摘要

目的:目前有关骨髓间充质干细胞向内皮细胞诱导分化的研究较少.本实验分离和培养人骨髓间充质干细胞,用带有VEGF165的质粒转染人骨髓间充质干细胞,探讨血管内皮生长因子对其体外诱导分化的作用.方法:实验于2005～04/2006-04在吉林大学人兽共患病教育部重点实验室完成.取成人的已排除血液系统肿瘤疾病的新鲜骨髓(自愿提供),采用Percoll梯度分离培养骨髓间充质干细胞,于倒置显微镜下观察细胞形态变化和生长情况.原代细胞培养至增殖接近融合状态时,单克隆培养法分离传代培养,扩增骨髓间充质干细胞.采用流式细胞术检测细胞免疫学表型.在原核细胞大肠杆菌DH5α中复制扩增和提取,纯化、克隆pcDNA3.0-VEGF165质粒.用脂质体转染法转染骨髓间充质干细胞.应用流式细胞术检测诱导后骨髓间充质干细胞免疫学表型变化.并采用免疫荧光染色鉴定转染情况,并设质粒空载和未转染的骨髓间充质干细胞为对照.结果:人骨髓间充质干细胞原代培养1周后,造血细胞消失,贴壁细胞体积增大,呈现梭形外观,有粗大的细胞突起伸出.2周后细胞融合成单层,梭形突起变长,排列有明显的方向性,细胞排列成旋涡状、网状、辐射状.流式细胞术显示,人骨髓间充质干细胞免疫学表型CD44、CD29阳性,CD34、CD31、CD45阴性.VEGF165诱导骨髓间充质干细胞后CD44表达明显降低,CD31明显升高.免疫荧光染色显示,用FITC标记后的VEGF抗体使细胞显现绿色荧光,用cy3标记的CD31抗体使细胞显现了红色荧光.结论:转染后的骨髓间充质干细胞细胞表型发生明显转变,CD31表达率明显增高,呈现典型的内皮细胞的表型特征,这说明骨髓间充质干细胞具有向内皮细胞分化的潜能.