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摘要:
目的:比较传统及改良冻存法对人胎肝细胞保护效果,建立一种适合于人胎肝细胞冷冻保存的方法.方法:实验于2006-07/11在广州医学院进行.①人胎肝组织取自中期终止妊娠胎儿(20周,经胎儿亲属知情同意及医院伦理委员会批准).冷冻保护液包括A液(DMEM培养液含1.5 mol/L乙二醇+体积分数为0.2胎牛血清);B液(A液+0.1 mol/L蔗糖)两部分.②传统冻存法:用0.025%Ⅰ型胶原酶消化胎肝组织,分离、收集消化后的胎肝细胞.胎肝细胞在A液、B液中分别渗透平衡20 min后,在冷冻保护B液中经液氮蒸汽冷平衡5 min后迅速入液氮冻存,1周后复苏培养观察.③改良冻存法:胎肝组织在A液、B液中分别渗透平衡20 min后,在冷冻保护液B液中经液氮蒸汽冷平衡5 min后迅速人液氮冻存,1周后复苏,入DMEM培养液37℃孵育1 h,胶原酶消化胎肝组织,分离、收集消化后的胎肝细胞培养观察.④新鲜分离的胎肝细胞做为对照组.⑤复苏后分离所得胎肝细胞用锥虫兰染色评估细胞活率,并记录贴壁时间,观察集落生长情况.结果:①锥虫兰染色结果显示传统冻存法复温后的胎肝细胞活率为(73.8±2.2)%,明显低于新鲜分离的胎肝细胞活率(89.2±3.6)%及改良冻存法所得胎肝细胞活率(82.5±4.2)%(P<0.01).②贴壁情况观察发现新鲜胎肝细胞与改良冻存法胎肝细胞于培养24 h开始贴壁,而传统冻存法胎肝细胞贴壁时间滞后48 h.③新鲜胎肝细胞及改良冻存法胎肝细胞于第3天出现生长集落(细胞数>10为一个集落),传统冻存法胎肝细胞在第5天出现生长集落,集落的数量低于改良冻存法及对照组(P<0.01).结论:改良冻存法可避免冻存前损伤,提高细胞对冷冻的耐受性和冻存复温后细胞的活率.
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内容分析
关键词云
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文献信息
篇名 传统及改良冻存法对人胎肝细胞保护效果的比较
来源期刊 中国组织工程研究与临床康复 学科 医学
关键词 胎肝 低温保存 改良法
年,卷(期) 2007,(15) 所属期刊栏目 技术与方法
研究方向 页码范围 2814-2816,2825
页数 4页 分类号 R575
字数 4258字 语种 中文
DOI 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.15.004
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 王燕蓉 宁夏医学院组织学与胚胎学教研室 22 76 3.0 7.0
2 黑常春 宁夏医学院组织学与胚胎学教研室 9 23 3.0 4.0
3 马宁芳 广州医学院组织学与胚胎学教研室 23 98 6.0 9.0
4 张征宇 广州医学院组织学与胚胎学教研室 7 14 3.0 3.0
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节点文献
胎肝
低温保存
改良法
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旬刊
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21-1581/R
大16开
沈阳浑南新区10002信箱
8-584
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