传统及改良冻存法对人胎肝细胞保护效果的比较

• 作者: 张征宇 王燕蓉 马宁芳 黑常春
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 胎肝 低温保存 改良法
• 年，卷（期）: 2007,（15）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2814-2816,2825
• 页数: 4页
• 分类号: R575
• 字数: 4258字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.15.004

摘要

目的:比较传统及改良冻存法对人胎肝细胞保护效果,建立一种适合于人胎肝细胞冷冻保存的方法.方法:实验于2006-07/11在广州医学院进行.①人胎肝组织取自中期终止妊娠胎儿(20周,经胎儿亲属知情同意及医院伦理委员会批准).冷冻保护液包括A液(DMEM培养液含1.5 mol/L乙二醇+体积分数为0.2胎牛血清);B液(A液+0.1 mol/L蔗糖)两部分.②传统冻存法:用0.025%Ⅰ型胶原酶消化胎肝组织,分离、收集消化后的胎肝细胞.胎肝细胞在A液、B液中分别渗透平衡20 min后,在冷冻保护B液中经液氮蒸汽冷平衡5 min后迅速入液氮冻存,1周后复苏培养观察.③改良冻存法:胎肝组织在A液、B液中分别渗透平衡20 min后,在冷冻保护液B液中经液氮蒸汽冷平衡5 min后迅速人液氮冻存,1周后复苏,入DMEM培养液37℃孵育1 h,胶原酶消化胎肝组织,分离、收集消化后的胎肝细胞培养观察.④新鲜分离的胎肝细胞做为对照组.⑤复苏后分离所得胎肝细胞用锥虫兰染色评估细胞活率,并记录贴壁时间,观察集落生长情况.结果:①锥虫兰染色结果显示传统冻存法复温后的胎肝细胞活率为(73.8±2.2)%,明显低于新鲜分离的胎肝细胞活率(89.2±3.6)%及改良冻存法所得胎肝细胞活率(82.5±4.2)%(P＜0.01).②贴壁情况观察发现新鲜胎肝细胞与改良冻存法胎肝细胞于培养24 h开始贴壁,而传统冻存法胎肝细胞贴壁时间滞后48 h.③新鲜胎肝细胞及改良冻存法胎肝细胞于第3天出现生长集落(细胞数＞10为一个集落),传统冻存法胎肝细胞在第5天出现生长集落,集落的数量低于改良冻存法及对照组(P＜0.01).结论:改良冻存法可避免冻存前损伤,提高细胞对冷冻的耐受性和冻存复温后细胞的活率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王燕蓉	宁夏医学院组织学与胚胎学教研室	22	76	3.0	7.0
2	黑常春	宁夏医学院组织学与胚胎学教研室	9	23	3.0	4.0
3	马宁芳	广州医学院组织学与胚胎学教研室	23	98	6.0	9.0
4	张征宇	广州医学院组织学与胚胎学教研室	7	14	3.0	3.0