摘要:
目的:观察纤维连接蛋白表面预处理增加新型聚酯纤维韧带(ligament advanced reinforcement system,LARS)的细胞相容性的作用.方法:实验于2005-09/11在上海复旦大学放射医学研究所骨细胞实验室完成.①实验分组:采用纤维连接蛋白表面修饰LARS人工韧带材料,为蛋白处理组.LARS人工韧带材料不做任何处理,为未处理组.蛋白处理组和未处理组在培养后2,4,6,8,10,12 d测定成骨细胞数量、MTT法测定吸光度(A值)、测定碱性磷酸酶值(A值).②实验评估:成骨细胞和与LARS人工韧带材料体外共培养.培养后3,7 d扫描电镜观察成骨细胞在两组材料上的形态.培养后7 d行碱性磷酸酶染色,观察细胞的形态及细胞和材料的细胞相容性情况.结果:①成骨细胞的数量:细胞在接种到材料后即开始增殖,在1~3 d内增殖较缓慢,自第4天起细胞增殖迅速,蛋白处理组至第8天达到增殖高峰,未处理组至第10天才达到增殖高峰.蛋白处理组材料和未处理组材料上细胞增殖基本符合正常细胞增殖.蛋白处理组材料细胞对数增长期较未处理组细胞增殖期长,且最高峰值也高(P<0.05).②成骨细胞的增殖能力:培养后2,4,6,8,10,12 d细胞增殖能力迅速增加,两组细胞增殖能力到第6天达最高峰,以后逐渐降低,在每个时间段蛋白处理组材料上的细胞的增殖能力均高于未处理组,差异有显著性意义(P<0.05).③成骨细胞的功能:培养后2,4,6,8,10,12 d细胞碱性磷酸酶值随时间推移基本稳定,略有下降,两组间差异无显著性意义(P=0.46).④扫描电镜下成骨细胞形态:培养后3 d,未处理组材料上细胞沿材料表面和纤维孔径之间生长,细胞形态尚不典型.蛋白处理组材料上细胞形态比较典型,具有伪足和触角结构,细胞表面具有大量毛刺样结构.培养后7 d,蛋白处理组材料和未处理组材料上细胞生长情况均较好,可见细胞大量汇合,沿纤维表面和纤维间隙之间生长,可见细胞在蛋白处理组材料上数量更多,汇合面积更大.⑤成骨细胞的碱性磷酸酶染色:成骨细胞与LARS人工韧带支架材料共培养后,培养后2 d起在材料的周边可见梭形和三角形的细胞游离出,进而贴壁汇合,数量逐渐增多,细胞生长情况良好,尤其是在蛋白处理组可发现更明显的细胞黏附生长情况.结论:LARS人工韧带在体外实验中表现出良好的生物相容性,采用纤维连接蛋白表面预处理的方法简便、有效,能够有效增加材料的细胞相容性.