兔骨髓间充质干细胞及聚羟基乙酸支架材料构建人工软骨的可行性

• 作者: 杨大鉴 胥方元 黄定强
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓 干细胞 软骨 聚羟基乙酸
• 年，卷（期）: 2007,（14）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 2761-2764
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 1665字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.14.005

摘要

背景:选择适合的生物支架与骨髓间充质干细胞作为新型的种子细胞复合能否构建出理想的组织工程化软骨?目的:观察将扩增的兔骨髓间充质干细胞接种于聚羟基乙酸构建人工软骨的可行性.设计:单一样本观察.单位:泸州医学院附属医院耳鼻咽喉头颈外科.材料:实验于2004-10/2005-10在泸州医学院完成.选用8只日本大耳兔,雌雄不拘,清洁级,二三个月龄,体质量1.5～2.0 kg,常温常湿环境饲养.聚羟基乙酸由美国Albany公司生产.方法:分离、获取、扩增实验兔骨髓间充质干细胞,将聚羟基乙酸剪成1 cm×1 cm×1 cm大小,并以多聚赖氨酸包被,通过将扩增的骨髓间充质干细胞接种于聚羟基乙酸上,按4 mL/cm3多点播散的方式均匀地接种在预湿的聚羟基乙酸支架上,体外诱导培养3周,作为实验组.将不加入骨髓间充质干细胞的聚羟基乙酸支架作为对照组.将实验组和对照组的标本分别植入4只自体兔腹腔内,进行体内培养6～12周后,分别取出实验组与对照组的标本,对其进行大体观察.同时以100 g/L中性甲醛固定,行5 μm切片,采用苏木精-伊红染色观察标本的组织形态学特点,进行阿新蓝染色以观察酸性粘多糖形成,进行甲苯胺蓝染色以观察异染性基质的形成,进行免疫组织化学染色检测Ⅱ型胶原蛋白的表达.主要观察指标:两组支架植入实验兔体内后6,12周时标本大体观察结果、不同染色观察结果及Ⅱ型胶原蛋白的表达.结果:纳入8只实验兔均进入结果分析.①支架植入实验兔体内后6及12周标本大体观察结果:支架植入兔腹腔6周后,实验组标本均仍被腹腔大网膜包裹,剥去大网膜后,有3个标本成淡黄色,光滑,质地中,外形与植入前基本一致,1个标本呈灰黑色,质地很软,标本不能成形.12周后,实验组标本的外形仍与植入前基本一致,呈灰白色,光滑,但质地明显较硬.而第6,12周的对照组的标本大部分均被吸收,以第12周的标本更明显,且均未见软骨样组织形成.②支架植入实验兔体内后6及12周不同染色观察结果及Ⅱ型胶原蛋白的表达:苏木精-伊红染色结果显示:6周时,有软骨陷窝样结构开始形成,聚羟基乙酸支架开始降解;12周时,复合物呈现软骨组织样的形态,有较明显的软骨陷窝样结构形成,细胞排列规则,成群存在于软骨陷窝样结构内,边缘的细胞小,中央的细胞大,聚羟基乙酸基本完全消失.阿新蓝染色结果:6周时,组织内有部分区域被染成淡蓝色;12周时组织的基质被广泛染成蓝紫色,说明有大量的酸性粘多糖形成.苯胺蓝染色结果:6周时,组织内可见蓝色异染性基质;12周时组织内呈现很强的蓝色异染.免疫组织化学染色结果:6周时,胞浆内可见棕黄色阳性颗粒,基质内有少量的Ⅱ型胶原蛋白表达;12周时,胞浆、基质内均有较强的阳性表达.Ⅱ型胶原蛋白的表达:6周时,胞浆内可见深棕黄色阳性颗粒,基质内有少量的Ⅱ型胶原mRNA表达;12周时,胞浆、基质内均有强的阳性表达.对照组标本基本上已被吸收,没有成形的组织工程化标本.结论:兔骨髓间充质干细胞在诱导剂作用下,经体外和体内培养后,可生成组织工程化类软骨.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胥方元	泸州医学院附属医院康复科	77	584	15.0	20.0
2	杨大鉴	泸州医学院附属医院康复科	26	192	8.0	13.0