脐血来源树突状细胞负载热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物的细胞表型鉴定及其特异性杀伤效应

• 作者: 刘玉侠 张新 徐鹏 王丹辉 王敏 魏军剑
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 树突细胞 肽类 抗原呈递 热休克蛋白质70 放射免疫疗法
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2017-2020
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 4997字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.11.008

摘要

目的:观察从脐血中提取的树突状细胞负载热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物的细胞表面表型特点及其所激活的细胞毒T淋巴细胞的杀伤活性.方法:实验于2003-10/2005-12在解放军军事医学院兽医研究所完成.①脐血来源于长春市妇产医院足月顺产的非高危妊娠产妇,要求无急慢性感染及血液系统疾病,产妇及其家属均签署知情同意书.热休克蛋白70由本室制备纯化.人骨肉瘤细胞Saos-2(北京肿瘤研究所,批号222RXB013538).②封闭式采集脐带血,体外分离脐血单个核细胞,调整浓度为1×109 L-1,接种于24孔细胞培养板,每孔均加入100μg/L人重组粒-巨噬细胞集落刺激因子、50μg/L白细胞介素4、10μg/L肿瘤坏死因子α.培养14 d后,鉴定细胞表面CD1a、HLA-DR的百分率.③用含胎牛血清的IMDM培养Saos-2骨肉瘤细胞至对数生长期,胰酶消化后调整细胞数为5×107 L-1.集传20代生长的Saos-2,冻融2次,低渗震荡,离心,上清用盐酸调pH至7.0,过滤后即为肿瘤抗原肽,与热休克蛋白70体外结合.④另取脐血40 mL,分离T淋巴细胞,诱导分化至第4天,加入热休克蛋白70-肿瘤抗原肽100μL,促使T淋巴细胞活化为细胞毒T淋巴细胞.⑤效应细胞(细胞毒T淋巴细胞)与靶细胞(Saos-2)按效靶比50∶1,25∶1,12.5∶1,6.25∶1,3.125∶1梯度,四甲基偶氮唑盐法检测细胞毒T淋巴细胞杀伤活性.结果:①细胞形态学观察:细胞因子诱导后第3天,镜下脐血细胞呈均匀散布的细胞聚体,胞体拉长;第7天可见不明显突起;第14天出现具有典型树枝状突起的树突状细胞.②细胞因子诱导后脐血单核细胞表面表型鉴定结果:经细胞因子诱导后,脐血单核细胞CD1a与HLA-DR表达率均较诱导前明显升高[0,(18.43±3.26)%;(4.03±1.66)%,(59.69±8.47)%;P均＜0.01].③细胞毒T淋巴细胞杀伤活性检测结果:培养72 h后,细胞毒T淋巴细胞与靶细胞Saos-2效靶比为50∶1时可杀伤决大部分肿瘤细胞,杀伤率为(97.50±11.24)%,效靶比从50∶1至3.125∶1可使靶细胞Saos-2生长呈梯度受到不同程度的抑制.单纯的树突状细胞及未经激活的T淋巴细胞对Saos-2细胞仅有微弱的生长抑制作用.结论:脐血来源的树突状细胞经过热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物负载致敏后,激活的细胞毒T淋巴细胞对人骨肉瘤细胞Saos-2具有极强的杀伤能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘玉侠	吉林省肿瘤医院肿瘤研究所	53	193	8.0	12.0
2	张新	吉林大学第一医院骨科	53	395	10.0	18.0
3	徐鹏	吉林大学第一医院骨科	43	297	11.0	16.0
4	王丹辉	吉林大学第一医院骨科	3	2	1.0	1.0
5	王敏	通辽市开鲁县麦新中心卫生院外科	1	0	0.0	0.0