新生鼠股骨破骨细胞存在位置的确定及其噬骨能力验证

• 作者: 李文海 王正东 颜南 马骊
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 巨核细胞 破骨细胞 细胞培养技术 组织构建
• 年，卷（期）: 2007,（19）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 3698-3700
• 页数: 3页
• 分类号: R329.4
• 字数: 3952字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.19.010

摘要

目的:确定新生鼠体内破骨细胞的存在位置,观察分离纯化后的破骨细胞形态结构,并检测其噬骨能力.方法:实验于2006-07/11在沈阳医学院中心实验室完成.①市售新鲜成年牛股骨皮质,临用前锯成1 cm宽条,磨片机磨成厚50 μm的1 cm×1 cm骨片,乙醇浸泡,晾干,紫外线照射消毒骨片的两面,放于DMEM培养基中4℃备用.②选取新生大鼠10只,处死取其后肢股骨,于中间位置截成两段,多聚甲醛固定,甲苯胺蓝染色确定体内破骨细胞的存在位置,并进行形态结构观察.③另选取新生大鼠6只,处死取其四肢长骨,刮取骨髓腔内及干骺端表面直至骨干成为极微小的碎片,机械分离破骨细胞,胰蛋白酶+乙二胺四乙酸联合消化.④吉姆莎染色观察细胞形态结构,抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞酶活性,扫描电镜观察破骨细胞形态结构,通过破骨细胞在骨片上的陷凹情况验证噬骨能力.结果:①鼠后肢股骨行甲苯胺兰染色,大量破骨细胞位于靠近干骺端骨小粱的骨陷凹中,核呈深蓝色,核大且多.②分离培养的破骨细胞数量较少,体积大,胞浆丰满,细胞突起延展,细胞核呈圆形或椭圆形,积聚在细胞中央或排列在细胞周边.胰蛋白酶+乙二胺四乙酸联合消化后可使混杂的单核基质细胞脱落,培养皿上大部分为多核巨细胞,破骨细胞纯化率达80%.③抗酒石酸酸性磷酸酶染色后的破骨细胞呈阳性表达,胞质内酶活性部位为红橙色.④成熟破骨细胞体积大,细胞突起延展,细胞周围出现伪足.破骨细胞在牛皮质骨片上培养时产生骨陷凹,吸收陷窝大部分呈梅花瓣形或腊肠形.结论:新生鼠体内破骨细胞多位于靠近干骺端骨小粱的骨陷凹中,具有噬骨能力,可使牛皮质骨片产生骨陷凹.为体外分析破骨细胞生物特性、骨吸收功能及骨组织工程应用提供丰富的细胞来源.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马骊	沈阳医学院外科教研室	19	113	5.0	10.0
2	李文海	沈阳医学院解剖教研室	14	60	5.0	7.0
3	王正东	沈阳医学院解剖教研室	60	178	7.0	9.0
4	颜南	沈阳医学院公共卫生学院学生科	57	125	6.0	8.0