缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子干扰性RNA抑制鼠视网膜新生血管的研究

• 作者: 夏晓波 宋伟涛 李岩 熊宇 熊思齐 蒋剑 许惠卓
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 视网膜新生血管化 RNA,小分子干扰 核蛋白质类 DNA结合蛋白质类 血管内皮生长因子类 基因疗法
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 921-928
• 页数: 8页
• 分类号: R77
• 字数: 6954字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0412-4081.2008.10.013

摘要

目的 探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)小片段干扰性RNA(siRNA)对小鼠视网膜新生血管的抑制作用.方法 本研究采用随机对照方法.构建HIF-1αsiRNA重组质粒.C57BL/6J小鼠玻璃体腔注射增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达质粒pEGFP-N1,1 d后视网膜铺片观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达.选7天龄C57BL/6J小鼠90只,17只为正常组,73只建立氧诱导的视网膜新生血管模型,分为模型对照组、空载体组和基因治疗组(HIF-1α siRNA组、VEGF siRNA组及共转染组).于出氧舱前1 d,向空载体组小鼠玻璃体腔注射空载体质粒;HIF-1α siRNA组注射HIF-1α siRNA,VEGF siRNA组注射VEGF165 siRNA,共转染组注射HIF-1αsiRNA+VEGF165 siRNA.采用荧光造影视网膜铺片方法观察血管形态变化;制作组织切片计算突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数;采用逆转录聚合酶链反应和Western blot检测视网膜HIF-1α和VEGF的表达.采用单因素方差分析和组间最小显著差法进行统计学分析.结果 pEGFP-N1经脂质体LF2000介导转染视网膜细胞后1 d即可见GFP表达.基因治疗组较模型对照组新生血管丛明显减少,荧光渗漏明显减轻,其中共转染组效果最明显.基因治疗组[HIF-1α siRNA组为(27.73±2.33)个,VEGF siRNA组为(15.43±3.23)个,共转染组为(8.70 ±2.88)个]较其他3组突破视网膜内界膜的细胞核数量减少,差异均具有统计学意义(F=3016.527,P＜0.01).视网膜HIF-1α mRNA及蛋白表达水平:模型对照组(1.08±0.06,0.383±0.009)和空载体组(1.09±0.05,0.386 ±0.010)较正常组(0.81 ±0.07,0.035±0.003)上调,而HIF-1α siRNA组(0.46±0.06,0.182±0.008)较模型对照组下调,抑制效率分别为57.4%和52.5%,差异均有统计学意义(F=139.804,2686.001;P＜0.01).VEGF mRNA及蛋白表达水平:模型对照组(1.53 ±0.07,0.340±0.004)和空载体组(1.59±0.06,0.337±0.009)较正常组(0.27±0.08,0,051±0.008)明显上调,而基因治疗组较模型对照组明显下调,差异均有统计学意义(F=421.423,2513.583;P＜0.01),其中共转染组下调最明显,抑制效率分别为85.6%和80.9%.结论 HIF-1α siRNA和VEGF165siRNA均可有效抑制小鼠视网膜新生血管形成,两种siRNA共转染抑制效果最明显.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏晓波	中南大学湘雅医院眼科	85	304	9.0	12.0
2	许惠卓	中南大学湘雅医院眼科	24	62	5.0	6.0
3	熊思齐	中南大学湘雅医院眼科	24	64	5.0	7.0
4	熊宇	中南大学湘雅医院眼科	6	9	2.0	3.0
5	宋伟涛	中南大学湘雅医院眼科	12	52	3.0	7.0
6	蒋剑	中南大学湘雅医院眼科	22	48	4.0	5.0
7	李岩	美国Texas大学MD Anderson癌症研究中心	2	1	1.0	1.0