含短C肽人胰岛素原类似物DesB30在毕赤酵母中的表达及纯化

• 作者: 冯强 张益 杨应彬 胡伟 范开 蔡绍皙 陈海蓉 高剑坤
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 医学
• 关键词: 表达系统 人胰岛素原 甲醇酵母
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 63-68
• 页数: 6页
• 分类号: Q51|Q78|R9
• 字数: 4202字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2008.01.010

摘要

合成含短C肽AAK,并去掉B链第30位苏氨酸(T)的人胰岛素原类似物:HMPIDesB30(human mini-proinsulin des B30)的cDNA,将其插入大肠杆菌和酵母菌的穿梭质粒pPIC9K.用电转移的方法将重组质粒HMPIDesB30/pPIC9K转入甲醇酵母GS115.用含不同G418浓度的YPD平板筛选高拷贝重组子.经优化条件下的高密度发酵,发酵液用SIPI-40大孔树脂吸附,大孔吸附树脂洗脱液经SP柱进一步纯化后,再用10～20 mmol/L Zn2+沉淀,能得到纯度为95%的HMPIDesB30.通过16.5%Tricine SDS-PAGE、HPLC和质谱分析,表达产物分子质量与理论分子质量相符,经高密度发酵,表达量可达1.0 g/L.纯化回收率可达60%.说明人胰岛素原类似物HMPIDesB30能在甲醇酵母中高效分泌表达,并能通过经济有效的方法纯化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡绍皙	重庆大学生物工程学院	220	1766	19.0	32.0
2	范开		8	63	5.0	7.0
6	陈海蓉		2	13	1.0	2.0
7	高剑坤	重庆大学生物工程学院	2	36	2.0	2.0
8	冯强		1	13	1.0	1.0
9	张益		1	13	1.0	1.0
10	胡伟		1	13	1.0	1.0
11	杨应彬	重庆大学生物工程学院	1	13	1.0	1.0