逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)在H5N1禽流感病毒基因检测中的应用

• 作者: 侯云德 匡治州 周蕊 李启明 马学军 高寒春
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: H5N1亚型禽流感病毒 逆转录环介导等温核酸扩增技术 实时监控
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 178-184
• 页数: 7页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3994字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2008.03.003

摘要

建立一种便捷、灵敏的检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)用于H5N1亚型禽流感病毒基因检测.该技术使用特异对应于靶序列中8个基因区段的6条特异引物,在等温条件下进行核酸扩增反应.对51份实验感染动物及病毒培养标本的H5N1亚型禽流感病毒的HA、NA基因区进行了RT-LAMP检测,并以SYBR Green Ⅰ为反应指示剂进行了逆转录环介导等温核酸扩增技术,对该反应进行实时监控,经对扩增产物做内切酶验证和测序分析,证明RT-LAMP技术的特异性;同时,用10倍系列稀释的RNA样品对该检测方法的灵敏度进行了测试.结果显示:利用RT-LAMP技术成功检测到H5N1禽流感病毒的HA、NA基因区,且RT-LAMP与Real-time PCR结果呈现很好的一致性.此方法的灵敏度可达到能检测10个拷贝RNA分子水平.因此,RT-LAMP技术应用于H5N1亚型禽流感病毒的快速检测是一种可行的方法.