双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta转化苜蓿的初步研究

• 作者: 唐克轩 孙彦 康俊梅 杨青川 熊恒硕
• 来源期刊: 中国草地学报
• 学科: 农学
• 关键词: 双价抗虫 转基因植株 CryIA(a/c)基因 pta基因 紫花苜蓿
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 21-26
• 页数: 6页
• 分类号: Q943.2|S541
• 字数: 5740字
• 语种: 中文

摘要

以中苜1号无菌苗子叶为外植体,采用农杆菌介导的叶盘法,将含有CryIA(a)/CryIA(c)基因、半夏凝集素(pta)基因和bar基因的双价抗虫植物表达载体p3300-Bt-pta导入苜蓿子叶中,在含除草剂的筛选培养基中连续筛选,获得抗性转化植株.研究了农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间等因素对苜蓿转化效率的影响,结果表明:各因素对苜蓿转化率均有不同程度的影响,当转化的菌液浓度OD600为0.6、浸染时间为10min、共培养时间为3d时转化效率较好.载体的抗性基因为除草剂草丁膦抗性的Bar基因,对子叶外植体的最佳筛选浓度为8mg/L;抑制农杆菌所用Carb的有效工作浓度为400mg/L,以后继代逐次减少用量到100mg/L;按此方法以根癌农杆菌菌株EHA105介导,将双基因Bt和pta导入紫花苜蓿品种"中苜1号",最终获得122棵除草剂草丁膦(ppt)抗性的植株,经过初步的PCR及RT-PCR分子生物学检测,有30棵检测到特异性条带,表明外源基因已成功整合到苜蓿基因组中,并在转录水平得到表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙彦	中国农业大学动物科技学院草地研究所	73	856	17.0	25.0
2	杨青川	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	112	1931	25.0	39.0
3	唐克轩	复旦大学生命科学院	36	1251	18.0	35.0
4	康俊梅	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	81	1022	17.0	29.0
5	熊恒硕	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	2	33	2.0	2.0