shRNAs介导的Smad2基因在小鼠成纤维细胞NIH/3T3中表达的沉默

• 作者: 任竹青 左波 徐德全 李凤娥 熊琪 熊远著 蒋思文 郑嵘
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 基因沉默 短发夹状RNA 转化生长因子β Smad2 免疫印迹法 小鼠
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 661-665
• 页数: 5页
• 分类号: R813.3
• 字数: 3503字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-1356.2008.05.010

摘要

目的 通过构建5个shRNA表达质粒,对转化生长因子β/Smads信号通路中受体调节性Smads蛋白中的Smad2的表达进行抑制.方法 针对鼠Smad2基因的mRNA序列,设计合成了5条shRNA-Smad2 DNA序列,分别插入至shRNA表达载体中,获得了5个shRNA-Smad2表达质粒,将shRNA表达质粒转染NIH/3T3细胞,采用半定量RT-PCR和Western blotting方法,检测shRNA表达质粒对Smad2表达的抑制效果.结果 编号为2.4的shRNA-Smad2表达质粒能够显著降低Smad2的表达,同时发现由不同的shRNA-Smad2表达质粒组成的RNAi池,产生的抑制效果比单个RNAi表达质粒的抑制效果明显提高.结论 成功地构建了特异、高效抑制Smad2表达的shRNA表达质粒.