人胰岛新生相关蛋白基因毕赤酵母表达载体的构建

• 作者: 何飞英 卓凤婷 曾展军 沙建平 王玲 薛耀明 陈炫 魏民
• 来源期刊: 中华胰腺病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 毕赤酵母 基因表达 胰岛新生相关蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 119-121
• 页数: 3页
• 分类号: R5
• 字数: 1780字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2008.02.015

摘要

目的 构建分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP)载体毕赤酵母.方法 通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列处,再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K,Sal Ⅰ酶切线性化重组质粒αINGAP/pPIC9K.电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的 基因INGAP,甲醇诱导rhINGAP的表达,Western blotting鉴定目的 蛋白,ELISA法定量测定其含量.结果 重组表达质粒αINGAP/pPIC9K经酶切获得758bp片段,符合α因子与INGAP片段融合的长度,筛选得到3个阳性转化子,培养上清含有与抗INGAP抗体反应的蛋白.结论 成功构建了分泌INGAP蛋白的毕赤酵母菌株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卓凤婷	南方医科大学附属南方医院内分泌科	6	10	2.0	3.0
2	魏民	南方医科大学附属南方医院内分泌科	7	5	1.0	1.0
3	曾展军	南方医科大学附属南方医院内分泌科	6	4	1.0	1.0
4	薛耀明	南方医科大学附属南方医院内分泌科	227	1699	23.0	31.0
5	王玲	南方医科大学附属南方医院内分泌科	26	150	7.0	11.0
6	何飞英	南方医科大学附属南方医院内分泌科	36	159	6.0	12.0
7	沙建平	南方医科大学附属南方医院内分泌科	23	61	5.0	7.0
8	陈炫	暨南大学第一附属医院临床实验中心	13	59	4.0	7.0