多药耐药细胞株A549/Gem的建立及其生物学特性研究

• 作者: 刘广贤 刘晓晴 朱运峰 李晓兵 林莉 王伟霞 郑晓玲
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 吉西他滨 耐药 非小细胞肺癌 基因
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 55-61
• 页数: 7页
• 分类号: R730.53|R734.2
• 字数: 4960字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2008.01.014

摘要

背景和目的 多药耐药是导致非小细胞肺癌患者生存期缩短的重要因素.本研究建立了多药耐药细胞株A549/Gem;通过研究其生物学特性,初步从细胞水平分析其获得性耐药的可能机制.方法以人肺腺癌细胞株A549为亲代细胞,采用"临床血浆峰浓度冲击与逐步增加剂量相结合诱导"法,用吉西他滨进行诱导,建立多药耐药细胞株A549/Gem,把诱导过程中的细胞命名为A549/Gem'.分别在诱导前、诱导过程中和诱导成功后的三个不同时间点,应用MTT法检测其耐药指数和对其他化疗药物的敏感性,置于倒置光学显微镜下观察形态学特征,通过绘制生长曲线计算倍增时间,流式细胞术分析细胞周期分布,免疫细胞化学染色检测P53、EGFR、c-erb-B-2、PTEN、PCNA、c-myc、VEGF、MDR-1、Bcl-2、nm23、MMP-9、TIMP-1和CD44v6蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检测RRM1 mRNA表达.结果 A549/Gem++细胞对吉西他滨耐药指数为163.228,对长春瑞宾(耐药指数为5.587±1.210)、多西他赛(耐药指数为102.147±10.259)、氟尿嘧啶(耐药指数为38.694±9.635)、依托泊甙(耐药指数＞1000)、顺铂(耐药指数为2.357±11.209)耐药,对紫杉醇(耐药指数为0.264±0.024)、奥沙利铂(耐药指数为0.596±0.128)敏感;倍增时间(146.941h)比A549细胞(186.479h)缩短,G0-G1期细胞(分别为77.07%、71.30%)增多,失去PTEN、PCNA和MDR-1表达,P53、Cerb-B-2和bcl-2表达减弱,出现EGFR(+)、c-myc(+)表达,nm23表达增强,而MMP-9、VEGF、CD44v6和TIMP-1表达无变化,RRM1 mRNA的相对表达量明显增多.A549/Gem细胞对吉西他滨的耐药指数为129.783,并保持长春瑞宾(耐药指数为4.969±1.203)、多西他赛(耐药指数为58.669±15.206)、依托泊甙(耐药指数＞1000)、顺铂(耐药指数为92.594±0.269)耐药性和紫杉醇敏(耐药指数为0.584±0.115)感性,但均较A549/Gem'细胞有所降低,而对奥沙利铂的敏感性(耐药指数为0.259±0.195)和对氟尿嘧啶的耐药性(耐药指数为0.958±0.152)消失,倍增时间(155.749 h)比A549/Gem'细胞稍延长,G0-G1期细胞稍减少,P53、EGFR、PCNA和MDR-1表达与A549/Gem'相同,出现TIMP-1、PIEN表达,Cerb-B-2、MMP-9、c-myc和bcl-2表达增强,nm23表达消失,而VEGF和CD44v6表达始终无变化,RRMI mRNA的相对表达量较A549/Gem'明显减少.与A549细胞相比,A549/Gem细胞逐渐呈现出如下形态学特征:形态不规则、形态各异、大小不一,且透光性减弱.结论 A549/Gem细胞的生物学特性较A549细胞发生较大变化,其多药耐药性的发生与多种基因表达有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑晓玲	军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌科	7	32	4.0	5.0
2	朱运峰	军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌科	18	87	6.0	8.0
3	刘晓晴	军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌科	55	363	11.0	17.0
4	刘广贤	军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌科	16	78	4.0	8.0
5	林莉	军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌科	24	242	9.0	15.0
6	王伟霞	军事医学科学院附属307医院全军肿瘤中心肺癌科	6	49	5.0	6.0