用磁珠富集法分离亚麻基因组微卫星分子标记

• 作者: 何东锋 王孝纯 王玉富 王进 邓欣 陈信波 高原 龙松华
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 亚麻 微卫星 磁珠富集
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 2099-2105
• 页数: 7页
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3721/SP.j.1006.2008.02099

摘要

应用Dynal磁珠一生物素标记的微卫星探针(CT)15与亚麻基冈组DNA酶切片段杂交,捕获300～1 500 bp含有微卫星序列的DNA片段,连接到pMD18-T载体中,构建富集微卫星序列的小片段插入文库.利用接头引物和根据微卫星核心序列设计的引物VRV(CT)15使用PCR方法直接对文库筛选,从422个转化子中获得了104个阳性克隆,对其进行测序分析,获得了97个微卫星序列,微卫星序列的富集效率达到22.99%,PCR扩增筛选效率93.27%.对97个微卫星序列进行比对分析,其中51个重复序列的两端序列高度相似,据其设计的特异引物对阳性克隆进行2次筛选,能淘汰相似度高的同类序列,提高筛选亚麻微卫星标记的效率.