EB病毒gp85N端片段的原核表达与初步鉴定

• 作者: 兰风华 吴玉水 朱忠勇 涂向东 程烽 连云宗 邱龙翔
• 来源期刊: 福州总医院学报
• 学科: 医学
• 关键词: Epstein—Barr病毒 gp85 表达 免疫原性
• 年，卷（期）: fzzyyxb_2008,（1）
• 页码范围: 22-24
• 页数: 3页
• 分类号: R394

摘要

目的：构建EB病毒的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达；分析非搪基化的EB病毒包膜搪蛋白gps5N端截短片段的抗原性。方法：采用基因工程技术，以EB病毒B95—8细胞培养上清为模板，PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片断。PCR产物经HindⅢ和xho Ⅰ双酶切，并插入原核表达载体pGEX-5T，构建pGEXST-85N重组表达质粒。在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85N蛋白。纯化表达的蛋白进行蛋白免疫印迹鉴定，并免疫BALB/C小鼠。结果：序列分析表明。插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全—致。重组表达的蛋白的分子量约为45kD,与预期大小相符。可溶性重组蛋白纯化后免疫雕LuyC小鼠，经ELISA检测获得了高效价的多克隆抗体，且gp85单抗可识别所表达的gp85N抗原。Western blot结果显示，该抗原可与小鼠免疫血清起特异反应。结论：表达并纯化的EB病毒的截短gp85N重组蛋白具有良好的抗原性，为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供条件。