含绿色荧光蛋白报告基因rhPDGF-BB非融合型表达载体的构建及其转染

• 作者: 于德民 宋丹 张绍敏 李兰英 毋中明
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 遗传载体 绿色荧光蛋白质类 仓鼠 卵巢 转染
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 486-488,后插1
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2008.07.003

摘要

目的:构建并转染含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的重组人血小板衍化生长因子-BB(rhPDGF-BB)非融合型表达载体,为采用转基因工程化细胞修复糖尿病溃疡创面奠定基础.方法:从人脐静脉内皮细胞(human umbil ical vein endotllelial cell,HUVEC)中分离总RNA,行RT-PCR获得rhPDGF-BB cDNA,构建克隆质粒pMD 19-T/rhPDGF-BB,经测序正确后,再将该目的片段与真核表达载体pSELECT-GFPzeo-mcs连接,转化E.coli DH 5a感受态菌落筛选得到含GFP报告基因的非融合型表达载体,然后将其转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)并用免疫组化染色法鉴定.结果:PCR获得长度为681 bp的目的片段,经pSELECT-GFPzeo-mcs载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的rhPDGF-BB cDNA序列(NM-033016)完全匹配.结论:成功构建了非融合型表达载体pSELECT-GFPzeo-mcs/rhPDGF-BB,并实现了rhPDGF-BB基因在CHO的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于德民		16	66	5.0	7.0
2	张绍敏		2	3	1.0	1.0
3	毋中明		2	3	1.0	1.0
4	宋丹		2	3	1.0	1.0
5	李兰英		2	3	1.0	1.0