人端粒酶催化亚单位(hTERT)特异性核酶对乳腺癌细胞MCF-7活性的作用及影响

• 作者: 姜锐 樊丽 罗速
• 来源期刊: 北华大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 端粒酶 端粒酶催化亚单位 乳腺癌细胞MCF-7 核酶 基因治疗
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 生物科学·基础医学
• 页码范围: 321-326
• 页数: 6页
• 分类号: R737.9
• 字数: 3010字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-4822.2008.04.008

摘要

目的 探讨端粒酶特异性核酶对乳腺癌细胞MCF-7端粒酶活性、增殖和凋亡的影响.方法 设计合成RZ基因,构建人端粒酶锤头状核酶真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hTERT-RZ,测序鉴定.提取MCF-7细胞总RNA,RT-PCR扩增靶基因的cDNA片段,插入载体pMD18-T并测序鉴定.将核酶重组体及hTERT载体体外转录,琼脂糖凝胶电泳检测Rz的切割活性.核酶载体转染乳腺癌细胞MCF-7,RT-PCR法检测核酶重组子转染效率及核酶转染细胞中hTERT mRNA的表达量,TRAP法测定细胞端粒酶活性,MTT法、流式细胞仪测定细胞增殖及凋亡.结果 测序表明peDNA3.1(+)-hTERT-Rz和pMD18-T-hTERT构建成功.5%琼脂糖凝胶电泳表明体外转录出Rz和靶基因hTERT,Rz对靶基因hTERT具有切割活性.构建好的核酶真核表达载体转染乳腺癌MCF-7细胞.发现其潜伏期延长,对数生长期减缓,S期细胞比例降低,G1期细胞比例增高(P＜0.01).端粒酶活性检测发现端粒酶活性明显降低.结论 端粒酶催化亚单位特异性核酶对靶基因hTERT在体外和体内均有催化切割活性,该核酶在乳腺癌MCF-7细胞中抑制hTERT的表达和细胞增殖,为核酶应用于恶性肿瘤的基因治疗提供了实验依据和新型工具酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	樊丽	北华大学基础医学院	30	35	4.0	5.0
3	罗速	北华大学基础医学院	25	101	4.0	9.0