AiiA蛋白的可溶性表达及其抗菌活性研究

• 作者: 关雄 张锋 杨梅 林彬辉 苏新华 郭丽清 黄志鹏
• 来源期刊: 分子细胞生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: aiiA基因 可溶性表达分离纯化 植物病害防治
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 465-472
• 页数: 8页
• 分类号: Q5
• 字数: 4872字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-520X.2008.06.005

摘要

AHLs是革兰氏阴性细菌在增殖过程中产生的一类信号分子,与其致病性密切相关.AiiA蛋白作为一种胞内解酯酶,能水解致病菌产生的AHLs分子,使内酯环开环后不能再激活某些胞外酶的表达,从而极大地减弱了细茵的致病性.本研究从苏云金芽孢杆菌LLB15中分离编码aiiA基因的质粒DNA,用PCR方法克隆aiiA基因,并利用pET载体构建6-His融合表达质粒pET29a-aiiA,转化E.coli BL21(DE3)茵株,并筛选得到E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA工程茵.在20℃的低温和0.8 mmol/L IPTG条件下,经25 h的诱导表达,获得了54.4μg/mL可溶性AiiA蛋白.通过镍柱亲和层析,在国内外首次纯化了带6-His标记的AiiA蛋白.水解活性和抗病性检测表明,该蛋白能水解AHLs分子,对胡萝卜欧文氏软腐病菌具有较强的抗病作用.