牛D型产气荚膜梭菌肠毒血症间接ELISA诊断方法的建立

• 作者: 于丹 任春雨 单雪梅 张营 李云霄 金鑫
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: D型产气荚膜梭菌 牛 裂解抗原 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 308-314
• 页数: 7页
• 分类号: S852.616.3
• 字数: 6201字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.04.008

摘要

根据菌体蛋白可以刺激机体产生相应抗体的原理,建立了以产气荚膜梭菌粗提菌体蛋白为抗原的检测牛D型产气荚膜梭菌抗体的间接ELISA.结果显示,D型产气荚膜梭菌菌体裂解抗原最适包被浓度为50 μg/mL,最适包被条件为37 ℃ 1 h;被检血清的最适稀释度为1∶100,酶标二抗的最适工作浓度为1∶1 000,血清与酶标二抗的反应时间均为37 ℃ 1 h;最适封闭时间为37 ℃ 1 h;PBST稀释液中脱脂乳的浓度为30 g/L;底物最适反应条件为室温25 min;阴阳性临界值为0.032.对采集于吉林省延边州的100份牛血清样品采用建立的间接ELISA进行了检测;结果,阳性率为11.0%.经特异性试验、重复性试验和与琼脂扩散抗体检测法比较,采用裂解菌体蛋白为抗原建立的ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性.