猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达

• 作者: 宁长申 宋海涛 张改平 张龙现 王秋霞 王选年 菅复春 赵光辉 鲁琨
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 猪囊尾蚴 M13h 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 749-753
• 页数: 5页
• 分类号: R383.34
• 字数: 4261字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5234.2008.10.010

摘要

目的 研究猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达. 方法 利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中扩增排泄分泌抗原M13h蛋白去除信号肽序列的基因,对其进行序列分析,并亚克隆至原核表达载体pET43a上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组菌株表达融合蛋白,并用Western blot对纯化后的融合蛋白进行鉴定. 结果 从猪囊尾蚴中克隆到去除信号肽序列的M13h的基因,其序列长度为204 bp,包含198 bp的编码区,与GenBank中西班牙分离株的核苷酸和氨基酸序列的同源性均为100%,与韩国的M13h蛋白的核苷酸与氨基酸序列同源性分别为95.7%和95.3%;经SDS-PAGE电泳鉴定,重组质粒表达产物分子质量单位约74 ku,其中M13h基因表达蛋白的分子质量单位为7.87 ku,与预期结果一致;经Western blot检测,纯化后的复性蛋白质可与兔抗全囊囊尾蚴血清发生特异性反应. 结论 pET43M13h重组质粒表达产物具有较高的保守性和特异性,可用于猪囊尾蚴病的免疫诊断.