洛氏脊漠甲抗冻蛋白基因的克隆、表达和功能检测

• 作者: 刘忠渊 张富春 王芸 马纪
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 洛氏脊漠甲 抗冻蛋白 克隆 序列分析 原核表达 抗冻保护
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 480-485
• 页数: 6页
• 分类号: Q966
• 字数: 5591字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0454-6296.2008.05.004

摘要

为了研究抗冻蛋白基因是否在新疆荒漠昆虫洛氏脊漠甲Pterocoma loczyi中存在,利用RT-PCR技术克隆获得了洛氏脊漠甲抗冻蛋白的cDNA片段,命名为Plafp743.测序结果表明洛氏脊漠甲Plafp743所编码的蛋白质由94个氨基酸组成,蛋白序列呈现规则结构CTX1X2X3X4CX5X6X7X8X9.利用原核表达载体构建重组质粒pGEX-4T-1-Plafp743,转化Escherichia coli BL21进行融合蛋白表达,SDS-PAGE结果表明抗冻蛋白PLAFP基因以可溶性融合蛋白形式表达,相对分子质量36 kD.用Glutathione Sepharose 4B亲和柱对表达蛋白进行纯化后,通过赤翅甲Dendroides canadensis抗冻蛋白的小鼠抗血清进行Western blot 分析,结果表明纯化的GST-PLAFP融合蛋白与赤翅甲抗血清能够发生特异性的免疫反应.大肠杆菌的低温抗冻保护实验结果证明,30 μg/mL的GST-PLAFP在-6℃对细菌具有显著的保护作用,且随着抗冻蛋白浓度的增加,抗冻保护作用的效果也随之增加.本研究首次报道了从荒漠昆虫洛氏脊漠甲扩增得到抗冻蛋白基因,提示抗冻蛋白可能是荒漠昆虫普遍采取的过冬生存策略,为进一步开发利用昆虫抗冻蛋白奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张富春	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	286	2034	23.0	31.0
2	马纪	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	80	657	14.0	23.0
3	刘忠渊	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	43	298	9.0	16.0
4	王芸	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	7	114	6.0	7.0