水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白的反相色谱纯化及其一级结构确认

• 作者: 余蓉 高玲
• 来源期刊: 食品与药品A
• 学科: 生物学
• 关键词: 水蛭素 瑞替普酶 融合蛋白 分离纯化 一级结构 反相高效液相色谱法
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-12
• 页数: 5页
• 分类号: Q516
• 字数: 3110字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-979X.2008.01.003

摘要

目的 探索水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的高效液相色谱分离纯化方法,确认其一级结构.方法 比较PST、Source 30、PLHP 3种不同的反相色谱介质纯化HV12p-rPA的性能,并建立反相分离纯化方法.用MALDI-TOF-MS法测定HV12p-rPA的相对分子质量(Mr),采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS),分离与分析该蛋白质经胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶酶切后得到的多肽混合物,通过二级质谱和数据库检索对分离出的各个肽段进行序列鉴定.结果 PST色谱介质性能最好.在流速2.0 mL/min条件下,采用线性梯度洗脱得到的目标蛋白质样品纯度≥95%.测得该蛋白质的精确Mr为41 473,与其理论Mr相符.肽段的实验检测值与理论平均值的数据比对表明,已检出肽段的总覆盖率≥85%.结论 确定了HV12p-rPA蛋白质的反相分离纯化方法,验证了该蛋白质一级结构正确.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余蓉	四川大学华西药学院	139	479	11.0	15.0
2	高玲	四川大学华西药学院	15	23	3.0	4.0