Ad-VEGF121和Ad-VEGF165重组腺病毒的构建和制备

• 作者: 宋衍秋 崔让庄 李汇 毛用敏 赵莉莉
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 血管内皮生长因子类 腺病毒科 重组,遗传 质粒 遗传载体
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 751-755,后插2
• 页数: 6页
• 分类号: R9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2008.10.003

摘要

目的:以pAdEasy-1缺陷性腺病毒系统为载体构建用于实验动物模型基因治疗的Ad-VEGF121和Ad-VEGF165重组腺病毒.方法:采用RT-PCR方法从人心肌组织中扩增获得VEGF121、VEGF165 cDNA片段,分别插入pUCm-T载体构成pUC-VEGFs;限制性内切酶Sal I、Kpn I切下目的基因片段,插入pAdTrack-CMV载体相应的多克隆位点构成pAdTrack-CMV-VEGFs.电转法将被Pme I切成线性的pAdTrack-CMV-VEGFs转入E coli BJ5183,与其中的pAdEasy-1同源重组成pAdEasy-VEGFs.阳离子脂质体法将被Pac I线性化的重组子转染293T细胞进行腺病毒包装.转染后7-11 d可在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白(GFP)呈彗星状,收集细胞反复冻融获得含重组腺病毒的上清液.感染293T细胞3～4次,待细胞出现细胞病变效应(CPE)时收获腺病毒(Ad-VEGFs),并用CsCl密度梯度超速离心进行纯化.结果:重组腺病毒在电镜下呈多面体,形态完整;Ad-VEGF121和Ad-VEGF165病毒滴度分别达到1.155×1012和1.2815×1012V.P/mL.结论:利用pAdEasy-1缺陷性腺病毒系统构建携带目的基因的重组腺病毒方法较简便,易掌握.获得的重组腺病毒纯度高、滴度高,适用于实验动物模型和体外培养细胞的基因治疗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毛用敏		61	252	9.0	12.0
2	崔让庄		53	208	7.0	11.0
3	宋衍秋		11	32	4.0	4.0
4	赵莉莉		18	37	4.0	4.0
5	李汇		1	2	1.0	1.0