增殖细胞核抗原突变体的稳定高表达对HeLa细胞顺铂敏感性的影响

• 作者: 位全芳 刘洋 周虎传 徐志刚 曾益军 杨劲 袁方 赵友光
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 增殖细胞核抗原 稳定转染 HeLa细胞 顺铂
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 498-502
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3610字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2008.06.007

摘要

目的 建立稳定高表达增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)或突变体PC-NA(mutant PCNA,mPCNA)目的蛋白的宫颈癌细胞系HeLa细胞,观察PCNA在顺铂诱导的DNA损伤修复中的作用.方法 采用显性负突变策略,通过构建重组人PCNA或mPCNA的真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-PCNA(His-PCNA)和pCDNA31/V5-His A-mPCNA(His-mPCNA),稳定转染到HeLa细胞中,G418筛选建立稳定高表达目的蛋白的HeLa细胞系;Western印迹法检测蛋白的表达情况;MTT法测定顺铂损伤后不同细胞系的细胞存活率.结果 真核表达质粒经酶切、测序分析与实验设计完全一致;稳定建系后,Western印迹结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;MTT结果显示稳定高表达突变体PCNA的细胞系与对照组相比,其细胞存活率呈明显下降趋势.结论 成功构建了真核表达质粒His-PCNA和His-mPC-NA;建立了稳定高表达该质粒的HeLa细胞系;稳定高表达突变体PCNA的细胞系对顺铂损伤更敏感.