WT1基因增强子构建位点对WT1基因启动子转录活性的影响

• 作者: 何军 傅铮铮 岑建农 胡绍燕 谷敏 赵晔 陈子兴 顾伟英
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 启动子,WT1基因 增强子,WT1基因 插入位点
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 209-214
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 3935字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2008.02.001

摘要

目的:以WT1基因启动子和增强子的功能片段为研究对象,探讨增强子构建在质粒的不同位点对基因启动子转录活性的影响.方法:利用基因重组技术将WT1基因增强子的功能片段分别插入在已含有WT1基因启动子的质粒,pEWP的不同位点(MCS中的BamH I、EGFP终止密码后的Not I和SV40polyA位点后的AflⅡ)中,将重组质粒转染慢粒白血病红白急变细胞株K562细胞、乳腺癌细胞株MCF-7细胞和人类胚胎肾转化细胞株293细胞,通过检测转基因细胞中EGFP的平均荧光强度来评估增强子对启动子的转录促进作用.结果:通过基因重组技术分别构建了含有WT1基因启动子的载体,即pEWP,和含有WT1基因启动子和增强子的载体,即pEWPE、pEWPD和pEWPA.流式细胞仪检测EGFP的平均荧光强度,发现pEWPA在293细胞和K562细胞中能够增强WT1启动子的转录活性,而pEWPE和pEWPD则无增强作用.3者均不能在MCF7细胞中增强WT1启动子的转录活性.结论:SV40polyA位点后插入增强子能够有效地增强启动子的转录活性,且具有细胞特异性.