冷冻对山羊精子转染外源DNA和体外制备转基因胚胎的影响

• 作者: 李福兵 王剑 王勇 赵永聚 魏泓
• 来源期刊: 动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 山羊 精子 外源DNA 冷冻 体外胚胎生产 质膜
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 方法与观点
• 页码范围: 1089-1097
• 页数: 9页
• 分类号: Q95
• 字数: 6665字
• 语种: 英文

摘要

本实验将鲜精和冻精分别与地高锌标记的线形化的pEGFP-N1质粒孵育转染,用原位杂交方法检测转染效率;PCR和Southern Blotting检测精子与外源DNA的整合效率;与成熟卵母细胞体外受精,PCR检测阳性胚胎比率,用透射电镜技术、碘化丙锭和羟化荧光素双探针技术和单细胞电泳(Single Cell Gel Electrophoresis,SCGE)技术,观察精子冷冻前后的超微结构、精子质膜完整性和精子核DNA损伤的变化,研究冷冻对山羊(Capra hircus)精子转染内化外源DNA和体外制备转基因胚胎的影响及机理.结果表明,冻精显著提高了转染外源DNA的效率(81.60%±16.59% vs 32.95%±2.93%,t=4.873,P=0.003;41.80%±6.26% vs 27.89%4±8.64%,t=2.634,P=0.039).PCR和Southern Blotting检测表明外源DNA已经整合到精子基因组上.用冻精与成熟卵母细胞体外受精,体外受精穿透率和卵裂率显著低于鲜精组(24.19%±3.15% vs 58.86%±3.73%,t=7.131,P<0.001;11.83%±2.37% vs 29.71±3.47%,t=4.302,P<0.001),但体外生产的胚胎PCR阳性率比鲜精组显著提高(45.45%4±10.87% vs 24.44%±6.06%,t=1.750,P=0.013).超微结构观察和双荧光探针检测都发现冷冻-解冻精于质膜完整性降低(8.34%4±4.21% vs 65.67%±6.46%,t=12.492,P<0.001),SCGE显示冷冻极显著增加了精子彗尾长度和彗星细胞比例(42.67μm±4.56 μm vs 21.14 μm±2.36 μm,t=5.644,P=0.005;60.00%±4.00% vs 17.37%±2.57%;t=15.787,P<0.001).冷冻-解冻可以提高山羊精子转染外源DNA的效率,冷冻破坏精子质膜完整性,解除质膜的阻碍作用,是提高外源DNA转染效率的一个主要原因[动物学报54(6):1089-1097,2008].

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏泓	第三军医大学基础部实验动物学教研室	242	2753	27.0	38.0
2	赵永聚	西南大学动物科技学院	20	177	7.0	13.0
6	李福兵	第三军医大学基础部实验动物学教研室	13	133	6.0	11.0
7	王勇	第三军医大学基础部实验动物学教研室	88	762	14.0	24.0
8	王剑	西南大学动物科技学院	33	126	6.0	10.0