正交设计优化假俭草SRAP-PCR反应体系及引物筛选

• 作者: 刘建秀 王志勇 薛丹丹 郑轶琦 郭海林
• 来源期刊: 草业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 假俭草 SRAP标记 正交试验设计 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 页码范围: 110-117
• 页数: 8页
• 分类号: S543+.903.7|Q94-33
• 字数: 6656字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1004-5759.2008.04.015

摘要

以假俭草叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对假俭草SRAP反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了假俭草的SRAP最佳反应体系.结果表明,假俭草SRAP-PCR最佳反应体系为:2 μL 10譖CR buffer、60 ng模板DNA、Mg2+1.50 mmol/L、dNTP 260 μmol/L、引物0.25 μmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U,总体积为20 μL.各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg2+浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小.运用该体系对4份假俭草种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从45个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合.这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学依据.