稳定过表达饰胶蛋白聚糖基因对大鼠肾系膜细胞凋亡的影响

• 作者: 刘媛 刘晔 吴慧娟 张志刚 王素霞 薛爱民 郭慕依 陈琦
• 来源期刊: 中华病理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肾小球肾炎,膜性 细胞凋亡 大鼠
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 实验病理学
• 页码范围: 174-178
• 页数: 5页
• 分类号: R6
• 字数: 4182字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-5807.2008.03.007

摘要

目的 观察稳定过表达饰胶蛋白聚糖(DCN)基因对大鼠肾系膜细胞(MsC)凋亡的影响.方法 采用脂质体介导法将pcDNA3.1A-DCN质粒稳定转染MsC,G418筛选阳性克隆.细胞免疫荧光法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法鉴定并获得转染DCN阳性的细胞株(MsC/DCN);脂质体介导法将DCN-siRNA瞬时转染MsC/DCN以干扰DCN表达,Western印迹法鉴定.Hoechst染色和流式细胞仪观察细胞凋亡及比率,Western印迹法检测活性凋亡相关激酶半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达.结果 成功建立了过表达DCN基因的细胞株MsC/DCN.MsC/DCN中凋亡率为(20.40±8.01)%,显著高于MsC的凋亡率(2.07±0.99)%(P＜0.01),部分MsC/DCN发生典型的形态学改变.活性Caspase-3的蛋白表达也明显高于MsC(P＜0.01).DCN-siRNA瞬时转染不仅有效干扰了MsC/DCN中DCN的表达和降低了细胞凋亡率,而且显著下调了活性Caspase-3的蛋白表达.结论 大鼠MsC中DCN基因的过表达能诱导MsC发生凋亡,为肾小球疾病中调控MsC增生提供了新的实验依据.