人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用比较

• 作者: 周为民 张陵林 彭堃 王仲 谭文杰 阮力 陆柔剑
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人冠状病毒 HCoV-NL63和HCoV-HKU1 实时荧光定量RT-PCR常规RT-PCR
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 305-311
• 页数: 7页
• 分类号: R373.1|Q78
• 字数: 4564字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2008.04.011

摘要

分别设计HCoV-NL63和HCoV-HKU1特异的引物与荧光标记探针,并合成含靶基因的模板RNA,建立常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR方法,对其灵敏性、特异性和可重复性以及用于临床样本的适用性等进行平行比较评价.结果表明:这两种方法皆可对HCoV-NL63或HCoV-HKU1进行特异性诊断,其中荧光定量RT-PCR方法检测灵敏度均可达10拷贝/25μL反应体积,不同批次重复检测结果间的变异系数均小于5%.上述方法应用于158份临床鼻咽拭子标本,其中荧光定量RT-PCR方法检出6份HCoV-NL63阳性标本,5份HCoV-HKU1阳性标本,而常规RT-PCR方法则分别检出HCoV-NL63阳性与HCoV-HKU1阳性各3份.对常规RT-PCR方法获得的阳性样品进行序列分析证实上述方法的可靠性.本实验成功建立了可用于临床标本检测的人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法,并初步证实荧光定量RT-PCR检测方法检出率明显高于常规RT-PCR方法,这为开展HCoV-NL63和HCoV-HKU1的流行监测及临床早期诊断提供了有效技术手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阮力	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	65	243	10.0	13.0
2	周为民	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	24	127	7.0	10.0
3	王仲		34	106	5.0	8.0
4	谭文杰	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	89	243	9.0	12.0
5	彭堃		11	93	4.0	9.0
6	陆柔剑	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	20	92	6.0	9.0
7	张陵林	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	10	67	4.0	8.0