具有抗HIV活性的突变型天花粉蛋白TCSYFF-KR的构建及原核表达

• 作者: 夏爱军 安群星 张献清 易静 穆士杰 贾宁 陈蕤
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 天花粉蛋白 人类免疫缺陷病毒 定点突变 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 5-7
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2525字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2008.01.002

摘要

目的:构建具有抗HIV活性的突变型天花粉蛋白(TCS),并将其在原核系统内进行表达与纯化.方法:借助计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇(YFF81-83和KR173-174),并依此设计适当的突变引物;以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增双突变型TCS全长基因,经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序;将所获阳性重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western印迹鉴定;用Ni-NTA亲和层析柱对所获突变型TCS蛋白进行纯化.结果:构建了突变型TCSYFF-KR,并获得了该蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达;经Ni-NTA亲和层析柱纯化,产生大量均一的突变型TCS蛋白.结论:TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了一条新途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	穆士杰	第四军医大学西京医院输血科	201	760	13.0	18.0
2	张献清	第四军医大学西京医院输血科	176	539	9.0	15.0
3	夏爱军	第四军医大学西京医院输血科	90	248	8.0	12.0
4	易静	第四军医大学西京医院输血科	30	68	4.0	6.0
5	安群星	第四军医大学西京医院输血科	61	151	7.0	9.0
6	陈蕤	第四军医大学西京医院输血科	30	38	4.0	4.0
7	贾宁	解放军总医院感染管理与疾病控制科	52	611	15.0	22.0