人脂联素原核表达载体PQE30/ADPN的构建及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 刘德敏 史晓文 孙颖 张捷
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 胞间信号肽类和蛋白质类 基因表达 大肠杆菌 遗传载体 脂联素
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 843-845
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2008.11.004

摘要

目的:构建人脂联素重组表达载体PQE30/ADPN,并在大肠杆菌宿主系统中表达出脂联素蛋白,对表达产物进行鉴定.方法:将构建好的人脂联素克隆载体PUC57/ADPN与原核表达载体PQE30通过双酶切方法位点特异地连接在一起,再转化人大肠杆菌JM109感受态细胞中.通过筛选得到含有人脂联素基因的重组载体PQE30/ADPN,并用IPTG在大肠杆菌M15中诱导表达.结果:PCR获得长度为753 bp目的片段,经PQE30原核表达载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入的目的片段与GenBank检索的人脂联素cDNA序列(Accession NM-004797)100%匹配;含重组Adiponectin质粒的大肠杆菌经0.4mmol/L的IPTG诱导6h后有表达.结论:应用并成功构建了人脂联素原核表达载体PQE30/ADPN,且在大肠杆菌中获得有效表达.