鸡源 Bursin-ScFv 噬菌体展示文库的构建及初步筛选

• 作者: 何后军 曲悦 王萍 谌南辉 邬向东
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 三肽囊素 抗独特型抗体 可变区 重链 轻链 单链抗体 单克隆抗体 噬菌体抗体库
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 488-493
• 页数: 6页
• 分类号: Q785
• 字数: 5156字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2008.04.018

摘要

本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链.以cDNA第一链为模板,根据来航鸡 IgG 抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增.在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因(大小分别约为370和320 bp).通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VL ScFv,将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库.并测得该库容量约为5×105,噬菌体中ScFv基因的插入率为80%,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为1011PFU/mL的初级噬菌体抗体库.用抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛,出现特异性富集.经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)特异性结合,并能促进抗体的生产.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邬向东	江西农业大学动物科学技术学院	87	363	11.0	14.0
2	谌南辉	江西农业大学动物科学技术学院	40	259	8.0	15.0
3	何后军	江西农业大学动物科学技术学院	88	530	14.0	18.0
4	王萍	江西农业大学动物科学技术学院	74	444	14.0	17.0
5	曲悦		12	13	3.0	3.0