Raf全长及氨基端、羧基端真核表达载体的构建和表达

• 作者: 万海粟 刘红雨 周清华 孙丽亚 朱文 李永文 王卓敏 肖文 范羽 陈军
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Raf 基因重组 真核表达
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 306-310
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3541字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2008.03.001

摘要

背景与目的 Raf是Ras-Raf-MEK-ERK信号转导通路中的关键分子,在多种人类肿瘤中存在高度活化,然而其生物学功能和详细调节机理目前尚未完全明了.本研究旨在构建人Raf基因全长(Raf-1),氨基端(N-Raf)及羧基端(C-Raf)真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达情况.方法 通过PCR方法扩增Raf-1,N-Raf和C-Raf目的片段,利用基因重组技术构建pCMV-Tas2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tas2b-C-Raf真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定.鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,Western blot检测目的蛋白的表达.结果 酶切和测序结果均证实pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tas2b-C-Raf真核表达载体的序列和编码框均正确无误,转染后的293T细胞经Western Blot检测可正确表达目的蛋白.结论 本研究成功构建TpCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体并可在293T细胞中表达,为今后进一步研究Raf基因的生物学机理奠定了基础.