富集文库─菌落原位杂交法筛选栉孔扇贝的微卫星标记

• 作者: 包振民 彭薇 战爱斌 李纪勤 李艳 王明玲 胡晓丽 胡景杰
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 栉孔扇贝 富集文库 菌落原位杂交 微卫星标记 多态性
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 页码范围: 353-361
• 页数: 9页
• 分类号: S917
• 字数: 5332字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-0615.2008.03.005

摘要

应用微卫星富集文库─菌落原位杂交法,筛选得到了40个栉孔扇贝的微卫星标记.用固定了(AG)15和(AC)15探针的尼龙膜(Hybond N+)捕捉含有微卫星DNA的片段,经洗脱、PCR扩增和TA克隆,构建栉孔扇贝的微卫星富集文库.利用ECL试剂盒(Amersham公司)标记的(AG)15和(AC)15探针进行菌落原位杂交筛选微卫星富集文库,阳性克隆经测序获得微卫星DNA.富集文库中1200个重组克隆经过菌落原位杂交后,532个(44.3%)为阳性克隆.任意挑选100个克隆测序,结果显示所有的克隆都至少含有一个微卫星位点.利用软件设计了65对特异性PCR引物,40对能扩增出清晰的带谱;利用48个栉孔扇贝个体评价微卫星位点,分析表明37个位点具有多态性.不同的位点获得的等位基因数目为2～14个不等,37个多态性位点共获得258个等位基因,平均每个位点获得7.0个等位基因.观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)及多态性信息含量值(PIC)的范围分别为0.1000～1.0000、0.1197～0.9831和0.1172～0.9782.结果表明,富集文库─菌落原位杂交法适合大规模筛选目标物种的微卫星标记.